杯[6]磺酸钠-亚甲基蓝超分子探针测定蛋白质的研究

杯[6]磺酸钠-亚甲基蓝超分子探针测定蛋白质的研究

杯[6]磺酸钠-亚甲基蓝超分子探针测定蛋白质的研究

王雪莹徐忠鹏王蕾罗川南*

济南大学化学化工学院山东济南济微路106号250022E-mail:Chm_luocn@http://www.1mpi.com

论文摘要

杯芳烃是对位取代的苯酚与甲醛反应得到的环状缩合物,具有空腔可调节,构象可变,易于修饰等特点[1],但是由于杯芳烃分子内氢键的原因,它的水溶性较差,相对于荧光检测技术所具有的高灵敏度和高选择性而言,这显然是一个很大的不足。直到各种水溶性良好的杯芳烃衍生物尤其是Shinkai等[2]合成一系列水溶性杯芳烃磺酸盐以后,尤其是大量的杯芳烃衍生物被合成出来并加以分析应用以后[3],它在生命科学、催化反应、分离分析等众多领域才得到了迅猛的发展。

蛋白质是重要的生命物质,虽然它本身可以发射内源光谱,但其荧光强度较低,灵敏度低。目前研究比较多的是利用有机染料为光谱探针来进行定量分析[4]。而利用超分子包络物作探针测定痕量蛋白质的方法较少[5]。本文利用水溶性杯[6]芳烃磺酸钠的特殊结构,通过它与吩噻嗪类染料亚甲基蓝形成的超分子荧光探针来检测蛋白质,建立了分析痕量蛋白质的方法,并对超分子探针与蛋白质之间的相互作用方式进行了初步的探讨。这将有助于更深入地揭示蛋白质与小分子或药物分子的作用机理,具有很好的理论价值及实际应用价值。

本文利用亚甲基蓝可产生自身荧光,激发波长为662nm,发射波长为689nm,加入杯[6]芳烃磺酸钠后其荧光猝灭,再加入蛋白质后其荧光强度增强,且荧光强度的增大与加入的蛋白质量在一定范围内成正比的性质,以杯[6]芳烃磺酸钠与亚甲基蓝形成的超分子包络物为探针,建立了测定蛋白质的新方法。实验结果表明,当pH在2.00~5.00范围内,1.00×10-4mol/L杯[6]磺酸钠的体积在2.00~5.00mL,1.00×10-5mol/L亚甲基蓝的体积在1.50~4.00mL之间,荧光体系静置时间在15~60min之间时,体系趋于稳定,且加入蛋白质前后荧光强度差值达到最大且基本不变。故本文选择实验条件为pH5.00B-R缓冲溶液2.00mL,1.00×10-4mol/L杯[6]磺酸钠3.00mL,1.00×10-5mol/L的亚甲基蓝用量为2.00mL,静置时间为15min。

该方法的线性范围为2.00×10-8~1.20×10-7mol/L,检测限为1.175×10-8mol/L,实验研究了常见金属离子以及部分氨基酸对测定结果的影响,并对多种市售奶粉和牛奶中的总蛋白质含量进行了测定,相对标准偏差小于±3%,回收率在95.6~102.5%,结果令人满意。同时对它们之间的相互作用机理进行了初步的探讨,结果表明:静电引力和疏水性作用力是它们进行作用的主要作用力。

关键词杯[6]芳烃磺酸钠,蛋白质,亚甲基蓝,超分子探针,荧光光谱

参考文献

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[5]LiYong(李勇),GuoJinlang(郭金梁),SongXinqi(宋心琦).ChineseJ.UniversityChemistry(大学化学),1994,9(2):1-8ShinkaiS,MoriS,KoreishiH,etal.HexasulfonatedCalix[6]ReneDerivatives:ANewClassofCatalystsSurfac-tantsandHostMolecules[J].JAmChemSoc,1986,108(9):2409-2415Chawla,H.M.,S.P.Singh,S.Upreti,Afacileone-potaccesstoconeand1,3-alternateconformersofcalix[4]arene-bis(amido)crowns.Tetrahedron,2007.63(25):5636-5642WangChun(王春),WuQiuhua(吴秋华),WangZhi(王志),ChenDagang(陈大刚).SpectroscopyandSpectralAnalysis(光谱学与光谱分析),2006,26(9):1672-1675GaoJianhua(高建华),ZhaiHaiyun(翟海云),ChenBin(陈彬).ChineseJournalofAnalyticalChemistry(分析化学),2002,30(3):295-297

Studyonthemensurationofproteinusingp-sulfonatedcalix[6]areneand

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