套式聚合酶链反应及DNA测序法检测急性上呼吸道感染儿童咽部生殖支原体
-RX22
研究所细菌室。其中!"（#$%&’）用作()*+和,-.测序对照，（01’）仅用作特异试验。!/(
二、方法
振荡送检试管，加样器吸取455!23标本处理：6标本混悬液，移入53786离心管内。离心（25555吸弃上清液。蛋白酶<法消化制备成9:8;(）78;(，
［4］
。)*+模板
分别以!"2>?9+-.基因第=3!"()*+检测：
"@#可变区序列和第$@%可变区序列为靶基因。自行设计二种!"种特异()*+引物，并优化反应体系。方法学及灵敏度、特异性试验见文献［4］。分别以第"@#可变区序列%3,-.序列测定：
和第$@%可变区序列内套)*+上游引物为测序引物。取()*+产物235!6直接进行四色荧光标记全自动测序（在美国)A公司.BC%&&型仪上进行）。
结
果
一、>=例上感儿童和D5例健康儿童咽拭子标本!"()*+检测结果及比较
二种!"()*+检测结果一致，结果见表2。
表!
健康儿童和急性上呼吸道感染儿童!"()*+检测结果及比较
组健康儿童
急性上呼吸道感染儿童
=注：!H53552&F2G35>，
别例数D5>=
阳性数（E）
（47）（=2）2%
二、!"第"@#可变区序列()*+阳性产物,-.序列测定结果
4例键康儿童、2%例上感儿童之咽拭子第"@
（#$#可变区序列()*+产物经,-.序列测定与!"
序列完全一致，而与!/(（01’）序列则不同。%&’）
三、!"第$@%可变区序列()*+阳性产物,-.序列测定结果
4名健康儿童、2=例上感儿童之咽拭子第$@
（#$%可变区序列()*+产物经,-.序列测定与!"
序列完全一致，而与!/(（01’）不同。有2例%&’）
（标本号为55%）上感儿童咽拭子标本阳性产物经
（#$%&’）序列和其他2>例标本,-.序列测定与!"
阳性产物序列相比较存在有图2中第%位、第24位
万方数据的二个“’点突变，详见图2
。!*”
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