绵羊 BMPR 2 I B 基因多态性及其与中国美利奴肉用多胎品系 产羔

南　京　农　业　大　学　学　报　　　　　　　　　　　　　　第28

卷 76 　　　　　　　　　　　　　　

thosewithgenotype++inchestgirthandchestwidth,butatageof120daystherewasnosignificantdifferencebetweenthesetwogroups.ThesefindingsindicatedthattheBMPR2IBgenewasamajorgenethatregulateslittersizeandaffectsgrowthanddevelop2mentduringacertainperiod.

Keywords:sheep;ChineseMerinomeat2Prolificacystrain;BMPR2IBgene;littersize;bodyweight;bodysize

繁殖和生长发育是绵羊的重要经济性状,特别是产羔数和生长速度是决定养羊业效益的重要因素。

近年来,国外3个研究小组几乎同时发现,控制Booroola美利奴羊多胎的主效基因(FecB基因)实质是绵羊骨形态发生蛋白受体IB基因(bonemorphogeneticproteinreceptorIB,BMPR2IB)编码区746位上发生了A→G转换,使受体细胞内激酶区编码蛋白由野生型的谷胺酰氨变为Booroola多胎羊的精氨酸

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(Q249R),并建立了PCR2RFLP检测方法。过去对FecB基因的研究主要集中在生殖内分泌、卵巢发育、排卵率以及产羔数等方面;我国

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也先后报道在湖羊和小尾寒羊中都发现存在FecB基因,但有关该基因在我国现有绵羊品种中的分布以及对产羔数和生长发育的影响还未见详细报道。本研究以BMPR2IB基因为候选基因,通过分析该基因在7个不同绵羊群体中的多态性分布及其与产羔数和生长发育性状的关系,旨在探讨BMPR2IB基因是否为决定我国湖羊高繁殖力的主效基因以及能否作为湖羊繁殖性状辅助选择的分子标记,为绵羊选育和杂交改良提供理论依据。

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1　材料与方法

111　供试羊群和样品采集

湖羊样品分别来自苏州市畜牧局种羊场(117只)、湖羊保种区(101只);夏洛来(21只)、陶赛特(56只新湖种羊场;中国美利奴肉用多胎品系绵羊((50只)和罗米丽羊(46只)样品均来自新疆农八师紫泥泉种羊场。

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每只羊在耳尖部用5g,采用酚2氯仿法抽提基因组DNA,-20℃112　BMPR2IB参照Davis等BMPR2IB基因扩增的引物,在下游引物3′端引入一个错配碱基,从而引入一个限制性内切酶(AvaⅡ)酶切位点(G|GTCC)。引物序列如下:

上游引物:5′2CCAGAGGACAATAGCAAAGCAAA23′;下游引物:5′2CAAGATGTTTTCATGCCTCATCAACAGGTC23′

PCR反应程序:94℃预变性5min;94℃30s,60℃30s,72℃30s,循环30次;72℃延伸5min。取PCR产物4μL并参照AvaⅡ酶(大连宝生物公司产品)说明书添加各种试剂,过夜。酶切产

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物经8%聚丙烯酰胺凝胶电泳,银染显色。分子量标准物为PBR322/MSPⅠDNAMarker(华美公司

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产品)。

选取不同基因型的检测样品,PCR产物经纯化后由上海申能博彩公司完成测序。113　个体基因型判断

绵羊基因组DNA经PCR扩增,产生190bp的特异性条带,BMPR2IB基因突变携带者基因组PCR扩增产物经酶切后只有160bp+30bp的片段,定义为BB型;而有190bp和160bp+30bp片段的定义为B+型;只有190bp片段的定义为++型(图1)

。114　数据收集与统计分析

图1　BMPR2IB基因PCR2RFLP检测

Fig11　DetectionofBMPR2IBgenebyPCR2RFLP

对所选绵羊个体(2～4岁)进行产羔数统计;在出生当天、90日龄和120日龄时空腹称重,体尺