针灸临床杂志２００８年第２４卷第８期

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医药出版社出版的《实验针灸学》大鼠穴位图谱及拟人比照法定位，选取水沟（唇裂鼻尖下ｌＩＩⅡｎ正中处）、内

ＩＩｌｉｎ。吸干组织周围水分后，滴加一滴ＳＡＢＣ，湿盒中３７℃孵育６０ｍｉｌｌ。加

×５

关（双）（前肢内侧，离腕关节约３－姗左右的尺桡骨缝

间）、极泉（双）（腋窝顶点，腋动脉搏动处）、尺泽（双）（在肘弯横纹偏外的凹陷中）、三阴交（双）（后肢内踝尖

直上１０Ｉ砌处）穴位。

针刺方法：采用浅刺针法，以医用２８号Ｏ．５寸针（华佗牌不锈钢毫针）快速直刺入穴位皮肤表层后放手，刺入深度分别为水沟、内关、极泉约ｌｒ啪，尺泽、三

ＤＡＢ偈０２显色剂５ｎｌｉＩｌ。将切片用自来水冲洗，蒸馏

水漂洗。用苏木素复染１－ｎｉＩｌ。盐酸酒精分色３０酒精上行脱水。二甲苯透明２×１．５ｍｉＩＩ。封片。１．６观察指标

８。

ｍｉＩＩ。以Ｏ．０１麟冲洗３×５

１．６．１观察分别经过２、７、１４天治疗后的浅刺针法组、常规针刺组大鼠和相应时间未经治疗的模型对照组、正常对照组大鼠的神经功能评分。

１．６．２观察分别经过２、７、１４天治疗后的浅刺针法组、常规针刺组大鼠和相应时间未经治疗的模型对照组、正常对照组大鼠脑组织缺血半暗带Ｆ硇、Ｂｃｌ一２蛋白表达。

１．７统计学处理方法

采用北京航天航空大学的图像分析系统进行图像分析。在钧０倍光镜下，在其相同脑区的额叶皮质、海马、纹状体（缺血半暗带）随机选择５个视野，计算各组缺血半暗区单位面积内阳性细胞数，取平均值（雾±ｓ：个／４００ｘ高倍镜）。采用华西医科大学卫生统计

阴交约２－砌；接Ｇ６８０５一Ｉ型电针治疗仪（上海医用电

子仪器厂生产）。刺激参数：疏密波，其疏波４№，密波２０拖，脉冲宽度Ｏ．５Ｈ坞，输出电压２ｖ，输出电流０．５ｌｎＡ。从造模２ｈ后开始第１次针刺，通电２０ｍｉＩｌ，以后按照２天、７天、１４天３个时间点针刺。

Ⅱ组（常规针刺组）：穴位同Ｉ组，采用常规针刺

法，刺入深度分别为水沟、内关、极泉约３ｔ砌，尺泽、三阴交约５ｚ肿，刺激参数同Ｉ组。

ⅡＩ组（模型对照组）：造模后不加任何处理因素，但在同一时间进行捆绑固定。

Ⅳ组（正常对照组）：正常大鼠不加任何处理因素，但在同一时问进行捆绑固定。１．５脑组织Ｆａｓ、Ｂｃｌ一２的检测方法

１．５．１脑组织的采集和固定采用灌注固定法

用３％戊巴比妥钠（３６ｎ∥ｋｇ）腹腔注射麻醉大鼠，麻醉后仰卧位固定于固定板上，用剪刀从腹腔沿胸骨切一纵行切口，充分暴露心脏，于右心耳处剪一小口，同时用一支７号输液器针头插入左心室，向主动脉方向灌人３７℃左右生理盐水８０。１２０“，直至右心房流出液变成清亮，再由左心室灌人４％多聚甲醛磷酸缓冲液大约１００ｌＩ｜ｌ固定。断头取出脑组织，观察鼠脑大体形态，去除脑干和小脑，放入４％多聚甲醛磷酸缓冲液中固定后，行石蜡切片，参考图谱取由ＭｃＡ支配的大鼠脑组织的ＧＰ（苍白球）、ＩＣ（内囊）、ＣＰｕ（尾壳核）、

学教研室研制的ＰＥ№３．１统计分析软件，单因素方差

分析进行显著性检验ｉ组间均值的两两比较采用ＳＮｌ（法。所有数据以“平均数±标准差”（雾±ｓ）表示。２结果

２．１各组大鼠神经功能评分

结果显示，模型组与正常对照组相比有明显的差异，大鼠造模后均出现行为异常，说明造模成功；常规针刺组及浅刺针法组与模型组比较，均有明显差异（Ｐ＜０．Ｏｌ和尸＜０．ｃ１５）；两针刺组问比较虽在各时间点见浅刺针法组评分低于常规针刺组，但经统计学处理，未见明显差异（Ｐ＞０．晒）。说明浅刺针法与常规针刺均能有效改善脑梗塞大鼠的神经缺损体征。见表ｌ。

表１各组大鼠神经功能评分（霉±ｓ），ｎ＝５

ＣＡ（海马）区域的冠状切片，片厚约１２啪，每只脑共

取１０张切片。１．５．２Ｅ够、Ｂｃｌ一２的检测采用ＭａｘｖｉｓｉｏｎｌＭ免疫组化（ＳＡＢＣ）法

切片经二甲苯脱蜡后，酒精下行入水（用二甲苯泡２×１５ｌｌ】ｉｎ，再用酒精擦洗，９５％２次，８０％１次，每次均２×３“ｎ）。流水冲洗３０ｓ，Ｈ２０２冲洗３０

ｓ，Ｏ．０１ＭＰＢｓ

与同一时问点模型对照组比较：’Ｐ‘０．０５，’。Ｐ＜Ｏ．ｍｏ

冲洗３×５ｍｉｎ。Ｏ．３％Ｈ２０２加甲醛溶液处理切片１５１１１ｉｎ（泡在染缸里）。ＰＢｓ振洗３×５ＩＩｌｉｎ。一般可加微

２．２各组大鼠脑组织缺血半暗带Ｆ鹤、Ｂｃｌ一２蛋白表达比较

各组大鼠脑组织缺血半暗带Ｆ够、Ｂｄ一２蛋白表达比较见表２、图ｌ～４，结果显示，３个时间点的空白组未

波修复，中火５耐ｎ，滴加柠檬酸。切片上滴Ｏ．１％嘣－

ｔｏＩＤ【一１００加ＰＢｓ，放置１５ＴＩｌｉｎ。切片组织上各加一滴

见‰、Ｂｃｌ一２阳性细胞表达，模型组均可见阳性细胞

表达（Ｐ＜Ｏ．０５），三个时间点模型组的Ｆ鹳高于正常组，Ｂｃｌ一２低于正常组（Ｐ＜Ｏ．０１）；３个时间点的浅刺

４％ＢｓＡ，在湿盒中３７℃孵育１５曲。用ＰＢｓ洗３×３

ｌＩｌｉｎ。吸干组织周围水分后，滴加一滴一抗，湿盒中３７℃孵育１２０ｍｉＩｌ。以Ｏ．０ｌＭ的ＰＢＳ冲洗３×５ｍｉＩｌ。吸干组织周围水分后，滴加一滴标记有Ｆ鹊单克隆抗体的二抗，湿盒中３７℃孵育１２０ｍｉＩｌ。（Ｂｅｌ一２免疫组

针法组与常规针刺组‰低于模型组，Ｂｃｌ一２高于模

型组（Ｐ＜ｏ．０１）；３个时间点的浅刺针法组Ｆ鸥低于常规针刺组，Ｂｃｌ一２高于常规针刺组（Ｐ＜Ｏ．０１）。说明浅刺针法可以抑制Ｅ眵阳性细胞的表达，促进Ｂｃｌ一２

化时则加入Ｂｃｌ一２单克隆抗体）。以０．Ｏｌ册ＢＳ冲洗３