３８ 论；Ｗ－与经验交流

疗有互补效应并能增强宫颈癌细胞对光动力的敏感性，减少耐药的发生率。因此，本研究通过ＨＭＭＥ—ＰＤＴ联合紫杉醇（ＰＴＸ）作用于人宫颈癌细胞，以初步

采用台盼蓝拒染法检测肿瘤细胞的存活率；饱和光动力组ＨＭＭＥ浓度２．５ｍｇ／ｍｌ及孵育时间４小时；于化疗组加入ＰＴＸ０．０２ｐ．ｇ／ｍｌ作用１２小时，再往化疗＋光敏剂组分别加入ＨＭＭＥ

０．７５ｐ．ｇ／ｍｌ、１．５

探讨其对宫颈癌细胞株的体外杀伤效应。ｌ资料与方法

１．１细胞培养人宫颈癌细胞株Ｈｅｌａ，购自中国科学院上海细胞生物学研究所。培养条件：ＲＰＭＩ一１６４０培养基，１０％小牛血清，置于３７０Ｃ５％ＣＯ：恒温孵育箱。

１．２

斗ｇ／ｍｌ、２．５｜Ｌｇ／ｍｌ，加入后于培养箱内避光培养孵育４小时。光源采用ＤＩＯＭＥＤ６３０ＰＤＴ系统，波长６３０ｎｍ红光照射在细胞上，光斑直径为４．０ｃｍ，光照能量密度：１．５Ｊ／ｃｍ２；光照后继续培养２４小时，每孔加入ＭＴｒ２０１ｚｌ，并继续避光培养４小时后，每孔加入二甲基亚砜１５０ｐ１，于酶标仪上测Ａ５７００Ｄ

Ｈｅｌａ生长曲线的绘制取生长良好的细胞，制

成细胞悬液后计数。按每个孔１ｘ１０４／ｍｌ接种于２４孔板上，每孔ｌｍｌ。２４小时后开始计数细胞，以后每隔２４小时计数１次，每次取３孔细胞，取平均值，连续８天。以时间为横坐标，以单位细胞数为纵坐标绘制生长曲线。

１．３

值，并按照以下公式计算细胞抑制率：细胞抑制率

（％）＝（对照组Ａ，，。ＯＤ值一实验组Ａ跏０Ｄ值／对照组Ａ５７００Ｄ值）１００％，实验重复３次。

１．４统计学处理采用ＳＰＳＳｌ３．０统计软件，方法采用析因设计的方差分析，组间差异用单因素方差分析，两两比较采用ＳＮＫ或Ｂｒｏｗｎ－Ｆｏｒｓｙｔｈｅ法（方差不齐时）。２结果

２．１

Ｍ＇ＩＴ法检测ＨｌＶＩＭＥ－ＰＤＴ联合ＰＴＸ对Ｈｅｌａ细

１０５／ｍｌ，每孔１００ｐ，１接种

胞的杀伤效应取对数生长期细胞，胰酶消化２—３分钟，调整细胞密度为ｌ

Ｘ

于９６孔培养板。将Ｈｅｌａ细胞分为６组，ａ：空白对照组，ｂ：化疗组，Ｃ：饱和光动力组，ｄ：化疗＋光敏剂组，其中ｄ组分为ｄｌ、ｄ２、ｄ３组。孵育２４小时后，

Ｈｅｌａ细胞生长曲线第３—５天为细胞指数生

长时期，提示实验过程中选择第３—５天的细胞为佳，

见图１。

２．２圈眦和激光无毒剂量的确定ＭＴｒ法检测

（２０Ｊ／ｃｍ２）对细胞生存率也无影响。

２．３

图１Ｈｅｌａ细胞生长曲线

相同孵育时间（≥４小时）及光照剂量（≥１．５Ｊ／ｃｍ２）

结果表明，单独使用２０ｐ，ｇ／ｍｌ浓度的ＨＭＭＥ对Ｈｅｌａ细胞没有明显的毒性不良反应；单独使用激光照射

１ＷｒＴ法筛选Ｈｅｌａ细胞最佳ＰＤＴ作用参数在

表１

条件下，当ＨＭＭＥ浓度在０．１ｐｅ／ｍｌ至２．５ｐ＃ｎｄ之间

时，ＨＭＭＥ—ＰＤＴ效应增加明显，对细胞增殖均产生了明显的抑制作用（Ｐ＝０．０００），当浓度在２．５斗ｇ／Ｉｎｌ以上时，ＰＤＴ效应无明显增加（Ｐ＞０．０５），见表１。

ＨｅｌＬｓ细胞最佳ＰＤＴ作用参数