目的研究大鼠急性局灶性脑缺血再灌注后脑和肝、肾细胞凋亡和Bax、Bcl-2的蛋白表达变化,探讨急性局灶性脑缺血再灌注后对肝和肾脏的影响。方法参照Longa等的线栓法采用阻断大鼠大脑中动脉后再灌注(MCAO),按随机原则将54只Wistar大鼠分为3个组：正常对照组(n=6)、假手术组(n=6)及缺血再灌注后2h、6h、12h、24h、48h、72h、5d 7个亚组,应用免疫组织化学SP染色技术检测脑和肝、

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J Ap o p l e x y a n d Ne r v o u s D i s e a s e s, J u n e 2 0 0 7, Vo l 2 4, No .3

文章编号： 1 0 0 3— 2 7 5 4 ( 2 O O 7 ) O 3— 0 3 1 8 - 0 3

大鼠局灶性脑缺血再灌注后脑和肝、肾B a x、 B c l一 2的蛋白表达 彭 华， 郭洪志， 赵忠新， 张侠， 江文静。 摘要： 目的研究大鼠急性局灶性脑缺血再灌注后脑和肝、肾细胞凋亡和 B a x、 B c l一 2的蛋白表达变化，探

讨急性局灶性脑缺血再灌注后对肝和肾脏的影响。方法参照 L o n g a等的线栓法采用阻断大鼠大脑中动脉后再灌 注( MC AO),按随机原则将 5 4只 W i s t a r大鼠分为 3个组：正常对照组 (一6 )、假手术组 (一6 )及缺血再灌注后 2 h、 6 h、 1 2 h、 2 4 h、 4 8 h、 7 2 h、 5 d 7个亚组，应用免疫组织化学 S P染色技术检测脑和肝、肾B a x、 B c l一 2的蛋白表达，并计数

计算出平均阳性率( L I ),同时检测了肝和肾功能改变。结果 ( 1 )大鼠脑缺血再灌注后各时相点的肝、肾脏组织均有不同程度的病理损害； ( 2 ) B a x、 B c l一 2在手术组的大鼠中呈明显的阳性表达，与正常对照组和假手术组之间比较 有非常显著性差异 ( P< O . 0 1, P< O . 0 0 1 )。结论凋亡明显增加。 大鼠急性局灶性脑缺血再灌注后肝、肾功能减退并出现组织细胞

关键词： 脑缺血再灌注； 大脑中动脉； 细胞凋亡； 肝脏； 肾脏； B a x; B c l一 2; 多器官功能障碍综合征 中图分类号： R7 4 3 . 3 1 文献标识码： A

A s t u dy of e x pr e s s i on of Ba x a nd Be l - 2 i n l i v e r a nd ki dne y af t e r a c u t e f o c al i s e he mi a- r e p e r f u s i oni n r at P E NG

Hu a, GUO Ho n g— z h i, ZHAO Z h o n g— x i n, e t a 1 .(

De p a r t me n t o fNe u r o l o g y, Ch a n g z h e n gHo s p i t a l, Th e Se c o n dM Z — t a r y Me c i c a l Un i v e r s i t y, S h a n g h a i 2 0 0 0 0 3。 Ch i n a)

Ab s t r a c t: Ob j e c t i v e To i n v e s t i g a t e e x p r e s s i o n o f Ba x a n d B c l一 2 g e n e i n b r a i n, l u n g a n d i n t e s t i n e s a f t e r a— c u t e f o c a l i s c h e mi a— r e p e r f u s i o n i n r a t .To d i s c u s s t h e e f f e c t o n l i v e r a n d k i d n e y a f t e r a c u t e f o c a l i s c h e mi a— r e p e r f u— s i on i n r a t s. M e t ho ds The a c u t e f o c a l i s c h e mi a— r e p e r f us i o n m od e l i n r at s wa s ma de by oc c l ud i ng mi ddl e c e r eb r a l

a r t e r y( M CA )wi t h t h r e a d f o l l o wi n g Lo n g a f o r t wo h o u r s a n d f o l l o we d b y r e p e r f u s i o n .Fi f t y— f o u r Wi s t a r r a t s we r e r a n d o ml y d i v i d e d i n t o t h r e e g r o u p s: n o r ma l c o n t r o l g r o u p(一 6), s h a m— o p e r a t i v e g r o u p(一 6 ), o p e r a t i v e g r o u p( 一

4 2 ) i n c l u d i n g 2 h, 6 h, 1 2 h, 2 4 h, 4 8 h, 7 2 h, 5 d s e v e n t i me p o i n t s .Ex p r e s s i o n o f B a x a n d B c l一 2 i n b r a i n, l i v e r a n d k i d—

n e y we r e d

e t e c t e d by s t r e pt a v i d i n pe r ox i d a s e.T h e p os i t i ve c e l l s we r e c oun t e d un de r l i gh t mi s c r o s c op e a n d t h e n t he

l a b e l i n g i n d e x ( LI )we r e c a l c u l a t e d a n d t h e f u n c t i o n o f l i v e r a n d k i d n e y we r e a s s a y e d .Re s u l t s ( 1 ) B r a i n, 1 i v e r, k i d—

n e y a t e a c h t i me p o i n t a f t e r i s c h e mi a i n r a t s we r e o b s e r v e d i n j u r i e s i n v a r y i n g d e g r e e s .( 2 ) B a x a n d B c l一 2 p o s i t i v e c e l l s i n t h e o p e r a t i v e g r o u p we r e s i g n i f i c a n t l y i n c r e a s e d . Th e r e wa s s i g n i f i c a n t d i f f e r e n c e b e t we e n t h e o p e r a t i v e

g r o u p a n d n o n— o p e r a t i v e g r o u p ( P< 0 . 0 1, P< 0 . 0 0 1 ) .Co n c l u s i o n Th e f u n c t i o n o f l i v e r a n d k i d n e y d e c r e a s e a n d a p o p t o s i s o f b r a i n, l i v e r a n d k i d n e y i n c r e a s e a f t e r a c u t e f o c a l i s c h e mi a— r e p e r f u s i o n . Ke y wo r d s: I s c h e mi a; Mi d d l e c e r e b r a l a r t e r y( M CA ); An i ma l mo d e l; Sy s t e mi c i n f l a mma t o r y r e s p o n s e s y n d r o me ( S I RS); Mu l t i p l e o r g a n d y s f u n

c t i o n s y n d r o me ( M 0DS); Ba x; Bc l一 2; Mu l t i p l e o r g a n d y s f u n c t i o n s y n d r o me ( M 0DS)

凋亡是一种受基因调控的自主性、程序性细胞死亡过程，是脑缺血再灌注损伤的主要环节。急性脑血管病 ( AC VD)致下丘脑和脑干等植物神经中枢受损导致肾上腺皮质激素分泌增加，神经、体液、免疫调节紊乱，诱导或直接导致各主要脏器的实质细胞凋亡，造成脏器功能的损害，甚至衰竭。本实验阻断大鼠大脑中动脉 ( MC Ao)致脑缺血再灌注，动态观察了肝脏和肾脏的细胞凋亡和凋亡基因 B a x、 B c l一 2 的蛋白表达。 1材料与方法

1 . 2模型制作手术组参照 L o n g a等]的线栓法(略有改进 )制作大鼠 MC AO再灌注模型，于左侧颈总动脉分叉处做一切。口，插入直径 0 . 2 5 mm的尼龙鱼线，经颈内动脉入颅，遇阻力后稍退出 0 . 5 mm,插入深度约为 1 8 . 3±0 . 5 mm,至大脑前动

脉近端，完全阻断 MC A起始部的血供， 2 h后抽出尼龙线实现再灌注.在再灌注后不同时间点 ( 2 h、 6 h、

1 2 h、 2 4 h、 4 8 h 7 2 h、 5 d)以过量水合氯醛麻醉处死动物，经主动脉依次灌注生理盐水 1 0 0 ml和4 多聚甲 醛2 0 0 ml,取出脑组织，自视交叉平面冠状切开，一并

1 . 1 实验分组由山东大学实验动物中心提供的5 4只成年雄性 Wi s t a r大鼠，体重 2 6 0±4 0 g,按照随机化原则分为 5个组：正常对照组 ( 一6 ),假手术组 (=6 ),手术组又分成 MC AO再灌注后 2 h、 6 h、 1 2 h、 2 4 h、 4 8 h、 7 2 h、 5 d时相点 7个亚组 (每个亚组 6 只)。

收稿日期： 2 0 0 6— 1 1— 2 5

作者单位： ( 1 .上海第二军医大学长征医院神经内科，上海 2 0 0 0 0 3; 2 .山东大学齐鲁医院神经内科，山东济南 2 5 0 0 1 2;赵忠新，通信作者)