提取物与应用

化研究尚未见到系统报道。为了开发利用野菊花资源，本研究以野菊花总黄酮含量及回收率等为考察指标，以正交试验方法优化总黄酮提取工艺。选用大孔吸附树脂分离纯化野菊花总黄酮，分别采用静态试验、动态试验等考察大孔树脂对野菊花总黄酮的分离纯化效果及影响因素，研究探讨分离纯化野菊花总黄酮的最佳工艺及各种条件因素。

６），表明本方法回收率良好。２．１．６

样品的测定

精确量取样品液１ｍＬ，置１０

ｍＬ容量瓶中，加水至刻度，摇匀，精确量取此液１ｍＬ，置２５ｍＬ容量瓶中，自“加水至６ｍＬ”起依据标准曲线法测定，由回归方程计算出样品中总黄酮的含量。

２．２野菊花总黄酮的提取［４］

取野菊花干品粗粉５０ｇ，根据单因素试验结果

１材料与仪器

野菊花均采自贵州省松桃县大兴镇同一地点，

每次取１０倍量的乙醇按表１条件，取Ｌ９（３４）正交设计表安排试验提取，提取后合并醇提液过滤，减压回收乙醇至尽，趁热过滤，加等量水并用４％氢氧化钠溶液调ｐＨ６￣７后３￣５℃冷藏静置１２ｈ过滤，６０℃加热后用蒸馏水定容至２５０ｍＬ，得总黄酮提取液，超滤后按２．１方法进行测定，按下式计算提取率：（样品总黄酮量／样品量）×１００，结果见表１、表２。

表１

因素水平因素

水平乙醇浓度／％提取温度／℃提取次数／次提取时间／ｈ

由本院生物技术重点实验室进行鉴定及采用统一的干燥方法加工制样，避免背景干扰。

芦丁标准品：美国Ｓｉｇｍａ公司，含量大于９８％；

Ｄ３５２０型、ＡＢ－８型、ＮＫＡ－９型、Ｄ４０２０型、Ｓ－８型大孔吸附树脂：南开大学化工厂；ＴＵ－１８００紫外可见分光光度计：北京普析。

２２．１

方法与结果

野菊花总黄酮的测定方法［３］标准溶液的制备

精确称取１２０℃干燥至恒质

Ａ

１２３

６０７０８０

表２

试验号

Ｂ４０６０８０

Ｃ１２３

Ｄ１２３

２．１．１

量的芦丁２００．３ｍｇ，置１００ｍＬ容量瓶中，加乙醇适量，置水浴上微热使其溶解、冷却，加乙醇至刻度，摇匀，精确量取上述试液１０．０ｍＬ，置１００ｍＬ容量瓶中，用蒸馏水稀释至刻度，摇匀即得。每１ｍＬ含无水芦丁０．２ｍｇ。

野菊花总黄酮提取正交试验结果

提取率

总黄酮含量

／（μｇ／ｍＬ）３７．６６３４４．７３３５４．６２４３２．０１３３３．４３５

／％４．００８４．８９２６．１２８３．３０２３．４７９

试验总黄酮含量提取率

号／（μｇ／ｍＬ）／％

２．１．２测定波长的选择把芦丁对照品、野菊花提取

１２３４５

６７８９

３５．６８１２４．５１３３０．１５５３１．０６５

３．７６１２．３６５３．０６９３．１８４

液同样处理并配成适当浓度加显色剂（方法见下）后在

４００￣６００ｎｍ波长范围内扫描，二者在５００ｎｍ处有最大吸收，选择５００ｎｍ为测定波长。

２．１．３标准曲线的制备精确量取上述标准溶液０、

１．０、２．０、３．０、４．０、５．０、６．０ｍＬ，分置２５ｍＬ容量瓶中，各加水至６ｍＬ；分别加５％亚硝酸钠溶液１ｍＬ，摇匀，放置６ｍｉｎ；分别加１０％硝酸铝溶液１ｍＬ，摇匀，放置６ｍｉｎ；然后分别加４％氢氧化钠溶液１０ｍＬ并加水至刻度，摇匀、静置１５ｍｉｎ，以吸收度为纵坐标，浓度为横坐标，在５００ｎｍ波长处测定吸收度，经回归处理得方程：Ａ＝０．００９１７４＋０．０１１８８Ｃ，

正交设计试验表明，乙醇提取野菊花总黄酮最优水平组合为Ａ１Ｂ３Ｄ３Ｃ３。即采用６０％乙醇、８０℃温度、每次３ｈ、提取３次。乙醇浓度（Ａ）、提取温度

（Ｂ）对总黄酮提取量影响大，提取时间（Ｄ）次之，提取次数（Ｃ）影响最小。

表３

正交试验结果方差分析

变异来源离差平方和自由度

ｒ＝

０．９９９８；吸光度线性范围０．１～０．６。２．１．４

精密度试验

精确量取每毫升含无水芦丁０．２

ｍｇ标准溶液１ｍＬ，按照标准曲线制备方法项下显色测定，连续测定６次，６份标准溶液测定结果ＲＳＤ＝

Ａ

ＢＣＤ

误差４７９．８５６２８３．９３１１４．７４４５２．２２５１４．７４４２２２２２

Ｆ

２３９．９２８３２．５４６１４１．９６６１９．２５７７．３７２１．０００２６．１１３３．５４２７．３７２

均方

Ｐ＜０．０５＜０．０５

注：Ｆ０．１０（２，２）＝９．００，Ｆ０．０５（２，２）＝１９．００，Ｆ０．０１（２，２）＝９９．００。

０．９５％，表明本方法精密度良好。２．１．５

回收率试验

精确量取按２．２项下方法提取的

样品液１ｍＬ，分别精确加入芦丁对照品溶液，按样品液测定方法操做处理求出总黄酮含量，连续测定６次，按下式计算回收率：回收率（％）＝（测得量－已知量）

方差分析表明，在不考虑交互作用的情况下，乙醇浓度、提取温度对总黄酮提取量有显著影响，而提取时间、提取次数无显著影响。

２．３野菊花总黄酮纯化用样品液的制备（验证试验）取野菊花干品粗粉５ｋｇ，根据２．２正交设计Ｌ９（３４）

／加入量×１００。平均回收率为９９．４７％，ＲＳＤ＝１．８５％（ｎ＝

Ｎｏ．７．筛选出的野菊花总黄酮乙醇浸提最优水平组合工艺