利用0.5%的曙红、10%的番红花、0.5%的亚甲基蓝和红墨水,分别对死伤秀丽隐杆线虫进行染色观察,进而找出一种清晰可见、简单易行的鉴别死伤线虫的方法。

广东农业科学

2 1第 9期 0 0年

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染色法鉴别秀丽隐杆线虫生命状态探究 高学娟，尹文彦，陆娟，屈长青 (. 1阜阳师范学院生命科学学院，徽阜阳 2 6 4;.衰老中草药安徽省T程技术研究中心，徽阜阳 2 6 4 )安 3 0 12抗安 3 0 1 摘要：用 05的曙红、0的番红花、.%的亚甲基蓝和红墨水，别对死伤秀丽隐杆线虫进行染色观察，而找出一种利 .% 1% 05分进

清晰可见、单易行的鉴别死伤线虫的方法。简 关键词：秀丽隐仃线虫；解冻复苏；死活鉴定

中图分类号： 5 .7 Q9 91

文献标识码： A

文章编号：0 4 8 4 2 1 )9 0 8— 1 10— 7 X(0 00~ 19 0

Re e r h o ie s a e i n i to f Cae r a di se e a s a c n lf t t de tf i n o i no h b t . l g ns i GA u -u n, I n yn, U Ja Q h n— ig 0 X e ja Y N We— a L u n, U C a g qn’ (. c olf 1 S ho o S in e u agNoma olg,u a g2 6 4,hn; ce c, yn F r l l eF y n 3 0 1C ia C e

2 E g e r g Tc n l yR s a hC n rfA t n h eeH ra M dc e F y n 3 0 1 h a . n i e n eh o g eer e t n一 gC i s e l e i n, ua g2 6 4, i ) n i o c eo i n b i C n Ab ta t hepa e s d O5 e sn 1 sr c:T p ru e .% o i.0% s fa ie ar nn .0.% meh ln l rh d ae a d r d n b ti ig t d ni￣ h re— 5 tye e bue tiy r t n e ik y sa nn o ie t te fe f lvn e td so ee a si r rt n to ih wa la n i l . iign mao e n C.lg n n ode o f d a meh d whc sce ra d smp e i Ke r s Ca n r a d ts e e a s t a a t r c v r;i e tfc t n y wo d: e o h b ii lg n; h w n i e o e y d n i a i

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秀丽隐杆线虫 fanradt l as属于线形动物 C eoh b i e gn) i e s 门、虫纲动物。个体非常小，虫只有 1 mm左右…。英线成 国 B e n r于 1 6 rn e 9 3年发现并对其生长发育状况进行了研究，林海等人发现秀丽隐杆线虫在 1℃的 NGM培养庞 6基生长良好作为一种模式生物，丽隐杆线虫现已被广秀泛应用于生物学和医学领域秀丽隐杆线虫个体小，且。而具有假死习性 .确定它的死活十分困难 1要 6 1统的做法是。传在解剖镜下用光、刺激或用细针触动看其是否活动来确热

mi n后，0 6%水浴快速解冻。于 1 0 0 r i心 lri弃 0/ n离 a r n, a上清。在 4个 E P管巾分别添加 2 0 L的 05曙红、 0 .% 1%番红花红、 .%亚甲基蓝和红墨水并标记，匀， 0 05混染

色 3 i。 10 0 r i心 1r n弃上清。 9缓冲 0 m n于 0/ n离 m i, a M 液冲洗、心，复 3次后，于体式显微镜下观察并拍离重置 照。

2结果与分析 4种染料对死伤的秀丽隐杆线虫染色效果如图 1。 南于活细胞具有选择透过性，红、红花和亚甲基曙番

定，但这种方法存在着很大的主观性和随机性。因此 .研在 究线虫的过程巾面临的一大难题就是如何快速、确地判准断被试线虫的死活，同时也是植物性杀线虫剂活性筛选这 中的一个难题 _ 7 I试验选用 05本 .%曙红，O l%番红花，.% 05

蓝等染液以及红墨水等对细胞有害的生物染料不能透过

亚甲基蓝和红墨水等各种试剂通过着色情况鉴别线虫死活，而找出一种清晰可见、单易行的鉴别死伤线虫的进简 方法

1材料与方法 1试验材料 A

供试秀丽隐杆线虫由中科院等离子体物理研究所吴李君研究员惠赠：大肠杆菌作为秀丽隐杆线虫的食饵。 供试试剂包括：.%曙红、0番红花、.%亚甲基 05 1% 05

05 .%曙红染色

l%番红花红染色 0

蓝、级红墨水：子培养基、 GM培养基和各种缓冲液高种 N的配制、肠杆菌及

虫体的饲养参照庞林海文章。大 12试验方法 .

利用 20 t 0 x M9缓冲液冲洗 N L GM培养基，下秀丽洗

隐杆线虫，分别置于 1 L的 E . m 5 P管中，8℃冷冻 l一0 5 收稿日期：0 0 0— 6 2 1—2 2基金项目：徽省高等学校省级优秀苛年人 A‘金项目f . 0安基 No 0l 2 05亚甲基蓝染色 .%红墨水染色注：中染色较深的线虫为冻死的，分染色或染色图部

S R 12 Q L4) 作者简介：高学娟 f9 4 )女， malgox eun 6 . i 18一， E— i:a . ja@13c n u o 通讯作者：屈长青 (9 2 )男，士，教授，— alq e 5@ 17一，博副 E m i:u q 1 8 1 3 r n 6 o l

较浅的线虫是冻伤的线虫。 图 1 4种染料对死伤的秀丽隐杆线虫染色效果

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