18中药药理与临床2008;24(5)

Impactof(2)Epigallocatechin232gallateongeneexpressionprofiles

ofhumanMDRhepatocellularcarcinomacellline

TangHaihua,ZhouMing,ZhangHaiying,LiangGang

(DepartmentofPharmacology,CollegeofPharmacy,GuangxiMedicalUniversity,Nanning　530021)

　　Aim:ToinvestigatethemechanismoftheMDR2reversingeffectofEGCG.TheMDR2expressinghumanhepatocelluarcarcinomacellline,BEL7404/ADMwasstudiedusingcDNAmicroarraystoobtaingeneexpressionprofiles.Methods:cDNAmicroarrayswereusedtoana2lysedifferencesingeneexpressionsinMDRhepatocellularcarcinomacelllinewithorwithoutEGCG.TheexpressionofCyclinG1proteininMDRHCCcelllinewasmeasuredbyWesternblottoconfirmtheresultofthecDNAmicroarrayanalysis.Results:Thereweresignificantchangesintheexpressionof210genesinBEL7404/ADMcomparingcellstreatedwithEGCGtocontrols.Amongthese,38geneswereup2regulatedand172genesweredown2regulated.Severalofthesegeneticchangescontributetowardsmechanismsofmultidrugresistance,inclu2dingupregulationofABCB10(MDR/TAP),TOP2A,TOP2B,CCNG1,anddown2regulationofABCB1,MVP,ARHD,HDAC5,GSS,GSTPI,HSPA1B,HSPB7,CDKN1A,RAB11B,RAB9P40.WesternblotanalysisconfirmedtheupregulatinofcyclinG1inBEL7404/ADMcellline.Conclusion:ThereversalofMDRbyEGCGinHCCinvolvesmultiplegenes,factorsandpathways.Theresultofwesternblotisinaccordancewiththegenechipanaysis.

Keywords　epigallocatechingallate;cDNAmicroarrays;hepatocellularcarcinoma;multidrugresistance;reverse

延胡索乙素对大鼠低O2高CO23表达的影响

,,金华　321000)

　　摘　要　目的:O2高CO2性肺动脉高压的作用及粘着酶激酶FAK、ERK和凋亡蛋白酶Caspase3表达的影响。方法:常压低O2高CO2舱制备低O2高CO2肺动脉高压大鼠模型,延胡索乙素ip40mg/kg。右心导管法测肺动脉压;光镜下测定肺细小动脉管壁面积/管总面积(WA/TA)、肺细小动脉中膜厚度(PAMT);免疫组化法检测细胞外信号调节激酶(ERK2)、Ⅰ型胶原的表达量;原位杂交法检测FAKmRNA、Caspase3mRNA的表达量。结果:延胡索乙素组mPAP显著低于低O2高CO2组;延胡索乙素组的WT/TA、PAMT也显著低于低O2高CO2组;延胡索乙素组肺细小动脉ERK2、I型胶原的相对含量、FAKm2RNA、Caspase3mRNA的表达均显著低于低O2高CO2组。结论:延胡索乙素能明显抑制肺动脉高压的形成,延缓肺动脉血管的重构,抑制FAK表达、增强Caspase3的表达可能是其重要的机制之一。　　关键词　延胡索乙素;肺动脉高压;血管重构;粘着斑激酶;Caspase3　　肺血管重构是肺动脉压力持续增高的主要原因,血管平滑肌细胞大量增殖是其重要的病理表现之一。粘着斑激酶(focal

adhesionkinase,FAK)作为一种非受体酪氨酸蛋白激酶,是细胞

内多条信号转导通路的交汇点,参与细胞增殖、凋亡等多种生物学功能的调节。凋亡蛋白酶Caspase则在细胞凋亡的过程中起着关键性的作用。延胡索乙素(dl2tetrahydropalmatine,dl-THP)有扩张血管,降低血压的作用,且有抑制细胞及细胞外基

质增生作用。本研究从影响细胞增殖与凋亡角度探讨延胡索乙素对肺动脉高压的作用及机理。

1　材料与方法

1.1　试验药物　延胡索乙素(dl2-THP),纯度为98%,南

京青泽医药科技开发有限公司提供。

1.2　动物　雄性SD大鼠45只,体重180～220g,由温州医学

院实验动物中心提供。

1.3　试剂　Ⅰ型胶原、细胞外信号调节激酶ERK2的山羊抗大鼠多克隆抗体、SABC免疫组化试剂盒以及FAKmRNA、Caspase3mRNA探针、原位杂交试剂盒均购自武汉博士德生物工程有限公司。

1.4　仪器　MEDLAB6.0生物信号采集处理系统,南京美易科技有限公司;CMIA彩色医学图像分析系统,华东理工大学。1.5　方法　大鼠随机分为3组:正常对照组吸入正常空气;低O2高CO2组置于常压低氧高二氧化碳舱内,充入N2使O2浓度维持在9～11%、CO2浓度维持在5.5～6.5%,多余CO2用碱石灰吸收,仓内水蒸气用无水CaCl2吸收,每天8小时,每周6天,连续4周。低O2高CO2+延胡索乙素组(简称延胡索乙素组)同法处理,在进舱前半小时腹腔注射延胡索乙素50mg/kg。1.5.1　肺动脉和颈动脉压力测定　4周后于次日称重,戊巴比妥钠35～50mg/kg腹腔麻醉,仰卧固定,行颈正中切口,分离右颈外静脉,采用右心导管法测量大鼠肺动脉压力。将聚乙烯塑