慢性脑缺血

２００８年第１４卷第４期

２００８．Ｖ０１．１４．Ｎｏ．４

Ｃｈｉｎｅｓｅ

中国中医基础医学杂志

Ｊｏｕｒｎａｌ

ｏｆＢａｓｉｃ

Ｍｅｄｉｃｉｎｅｉｎ

Ｔｒａｄｉｔｉｏｎａｌ

ＣｈｉｎｅｓｅＭｅｄｉｅｉｎｅ

２７３

【实验研究】

天智颗粒对慢性脑缺血大鼠神经胶质细胞增生的影响

张博爱１，陈烈冉２，高

林３，吴卫平４，刘洪波１，方树友１

（１．郑州大学第一附属医院神经内科，河南郑州４５００５２；２．南阳市中心医院神经内科，河南南阳４７３０００；

３．河南大学淮河医院神经内科，河南开封４７５０００；４．郑州大学校医院，河南郑州４５００５２）关键词：慢性脑缺血；血管性痴呆；星形胶质细胞中图分类号：Ｒ２８５ｊ５文献标识码：Ｂ文章编号：１００６．３２５０（２００８）０４．０２７３．０２本实验通过构建慢性脑缺血的大鼠模型，研究模型大鼠脑组织中胶质细胞的变化以及天智颗粒对

其的可能影响。

１材料与方法

１．１

经４％多聚甲醛溶液固定２４ｈ后石蜡包埋，作４—６ｐｔｍ厚切片备用。

１．５．２染色石蜡切片，常规脱蜡、水化。３％Ｈ，Ｏ，封闭，抗原热修复２０ｍｉｎ，滴加正常羊血清封闭２０ｍｉｎ，倾去，勿洗。滴加稀释一抗（稀释浓度均为１：ｌＯＯ）４０Ｃ过夜，滴加生物素化工作液３０ｍｉｎ，滴加辣根酶标记链酶卵白素工作液３０ｍｉｎ，以上每步骤后均用ＰＢＳ冲洗３次，每次５ｍｉｎ。ＤＡＢ显色：镜下控制反应时间，ＧＦＡＰ、Ｓ１００阳性细胞均为胞体和突触内出现棕黄色颗粒。自来水充分冲洗，苏木精复染，盐酸酒精分化，封片。

１．５．３分析计数在海马区或皮质区域，选择３个相邻视野，在２００倍光镜下随机查阳性细胞数，结果取３个视野的平均值。

１．６统计学处理

实验数据用均数土标准差（戈±ｓ）表示，两组均数比较采用ｔ检验。

２结果

２．１

药物与试剂

清洁级雄性ＳＤ大鼠，１４～１５月龄，体重５００９～６００９，由郑州大学实验动物中心提供。天智颗粒由河南宛西制药有限公司提供，５９／包，批号０４１２０１。ＧＦＡＰ一抗、Ｓ１００一抗、ＳＰ免疫组化试剂盒和ＤＡＢ显色试剂盒均购自北京中山生物技术有限公司。

１．２动物模型的制作

参照ＮｉＪ的方法制作慢性脑缺血动物模型。大鼠术前禁食１２ｈ，禁水４ｈ。１０％水合氯醛（０．３ｍｌ／１００９）腹腔注射麻醉。仰卧固定，颈前部去毛消毒后正中切开，分离出双侧颈总动脉，双重丝线结扎后剪断，间断缝合皮肤。术后动物送到通风的动物房饲养。假手术组除不结扎双侧颈总动脉外，余处理同模型组和治疗组大鼠。

１．３分组和给药

实验动物随机分为假手术组、对照组、模型组和天智颗粒治疗组。术后６０ｄ对大鼠进行灌胃处理：治疗组取天智颗粒按５９／ｋｇ的比例溶解于５ｍｌ蒸馏水中灌胃，模型组和假手术组取同量体积的蒸馏水代替，均为１次／ｄ，为期３０ｄ。最终各组大鼠均入组

８只。

１．４

大鼠行为学习记忆测试

对照组和假手术组行为记忆测试无统计学意

义，归为一组讨论。模型组和对照组相比，其行为记忆测试结果明显下降（Ｐ＜０．０５），说明模型制作是成功的。治疗组大鼠与模型组相比其行为记忆测试有所好转（Ｐ＜０．０５），但与对照组相比其行为记忆测试结果仍有统计学差别（Ｐ＜０．０５），说明治疗组行为学虽有所好转但仍未达正常。

２．２大鼠海马区ＧＦＡＰ阳性细胞数和皮质区域Ｓ１００阳性细胞数

光学显微镜下观察，对照组有少量的ＧＦＡＰ、￥１００阳性的胶质细胞（图１、４），模型组胶质细胞增生明显，胞体肿胀，突触增粗（图２、５），天智颗粒治疗后，可以减少胶质细胞的增生（图３、６）。统计学结果显示：治疗组大鼠海马区ＧＦＡＰ阳性细胞数和皮质区域Ｓ１００阳性细胞数比模型组有显著减少（Ｐ＜０．０５），但同样治疗组与正常组相比仍有统计学意义，未完全恢复至对照组水平。数据见表。

学习记忆测试

大鼠学习记忆用三等分Ｙ型迷宫箱进行测试。大鼠学习记忆成绩分别以其测试达到连续１０次中有９次（９／１０）正确反应时所需的电击次数表示。达９／１０正确反应时所需电击次数多少表示大鼠认知功能的优劣。

１．５免疫组化分析

灌注和切片１．５一

用１０％水合氯醛（３ｍＬ／

ｋｇ）腹腔注射麻醉动物，暴露心脏，先用约５００ｍＬ生

理盐水（３７０Ｃ）经升主动脉灌注冲洗，然后灌注４％多聚甲醛溶液（４０Ｃ，ｐＨ７１４）５００ｒａＬ。取出脑组织块，切取视交叉到小脑前的冠状位切片，其中包含海马，