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中国免疫学杂志 2 0 1 3年第 2 9卷

d o i: 1 0 . 3 9 6 9/ j . i s s n . 1 0 0 0 - 4 8 4 X . 2 0 1 3 . 0 9 . 0 0 5

胞形态结构及连环蛋白表达的影响① N. C a d h e r i n异常表达对 2 9 3 T细 李小英杨慈清②范义峰③贾阳阳④付苏雷胡阿珍④李晗林俊堂②⑤

(新乡医学院生命科学技术学院，新乡 4 5 3 0 0 3 ) 中国图书分类号 Q9 5 4 . 4 8 文献标识码 A 文章编号 1 0 0 0 48 4 X( 2 0 1 3 ) 0 9 - 0 9 1 4 - 0 4

[摘

要] 目的：实现鸡源 N— C a d h e i f n在 2 9 3 T细胞中的过表达及其抑制表达，进一步分析 N— C a d h e i f n异常表达对 2 9 3 T

细胞内源性 1 3 - e a t e n i n和 0【一 e a t e h i n的表达及细胞形态结构的影响。方法：采用脂质体转染法，设对照、过表达和抑制表达 3组， 将p C A G G S . G F P、 p C A G G S— N— C a d h e r i n和 p C A G G S— N . C a d h e r i n/ p G P U 6一 G F P— n e o— N— C a d h e r i n— s h R N A质粒分别转染到 2 9 3 T细胞 中.转染后 4 8小时观察拍照，荧光免疫组化检测 N C a d h e r i n和相关蛋白表达情况。结果： N— C a d h e r i n过表达后会改变 2 9 3 T细

胞的形态，其细胞突起明显增加，而对 N C a d h e i f n干扰后，突起又会消失，并且外源性 N . C a d h e r i n的过表达会使得 2 9 3 T细胞内 源性 3 - c a t e n i n和 . e a t e n i n的表达升高，抑制其表达 B— c a t e n i n和— c a t e n i n表达也随之减弱，并表现出 1 3 - e a t e n i n在核内的聚集。结论：异源性 N— C a d h e i f n的表达明显改变 2 9 3 T细胞的形态，并且内源性 p— c a t e n i n和— c a t e n i n的表达与 N C a d h e r i n的表达呈正相关。 [关键词] 2 9 3 T细胞；神经钙黏蛋白； R N A干扰； 3 -连环蛋白；一连环蛋白

Th e e fe c t o f c hi c k e n s o u r c e N- c

a d he r i n a b no r ma l e x pr e s s i o n o n t h e 2 9 3T c e l l mo r p ho l o g y a n d c a t e n i n e x pr e s s i o n L/X i a o— Y i n g, Y A N G C i— Q , F A N Y i— F e n g, J I A Y a n g— Y a n g,F 5“一 L e i, HU A— Z h e n, L I H a n, L I N J u n— T a n g .

C o l l e g e o f L i f e S c i e n c e a n d T e c h n o l o g y, X i n x i a n g Me d i c a l U n i v e r s i t y, X i n x i a n g 4 5 3 0 0 3, C h i n a [ A b s t r a c t] Ob j e c t i v e: T o a c h i e v e t h e c h i c k e n s o u r c e N— C a d h e r i n o v e r— e x p r e s s i o n a n d s u p p r e s s i o n o f e x p r e s s i o n i n 2 9 3 T c e l l s, f u r t h e r a n a l y s i s N. - c a d h e r i n a b n o r ma l e x p r e s s i o n c e l l s e n d o g e n o u s b e t a— c a t e n i n a n d a l p h a— c a t e n i n e x p r e s s i o n a n d c e l l mo r p h o l o g y c h a n - g e s .M e t ho ds:Li p o s o me t r a n s f e c t i o n me t h o d wa s us e d i n t he e x pe r i me n t,p CAGGS— GFP.p CAGGS— N— Ca dh e in f a nd p CAGGS— N— c a d—

h e r i n/ p GP U 6一 GF P n e o— N— C a d h e i f n— s h R NA p l a s mi d t r a n s f e c t e d i n t o 2 9 3 T c e l l s .a f t e r t r a l i s f e c t i o n 4 8 h t a k e p h o t o s a n d i mmu n o l f u o r e s e e n e e d e

t e c t i o n o f N— e a d h e r i n a n d p r o t e i n e x p r e s s i o n .Re s u l t s: T h e N— C a d h e r i n o v e r— e x p r e s s i o n c h a n g e 2 9 3 T c e l l mo r p h o l o g y,t h e p r o—

j e c t i o n a mo n g t h e c e l l s i n c r e a s e d s i g n i i f c a n t l y, w h i l e t h e N— C a d h e i f n i n t e r f e r e n c e t h e p r o j e c t i o n w i l l d i s a p p e a r .T h e e x o g e n o u s N— C a d— h e in r o v e r e x p r e s s i o n w o u l d i n c r e a s e e n d o g e n o u s b e t a— c a t e n i n a n d a l p h a— c a t e n i n e x p r e s s i o n i n 2 9 3 T c e l l s,i n h i b i t i o n o f t h e N— C a d h e r i n e x p r e s s i o n wo u l d l e a d t o b e t a— c a t e n i n a n d a l p h a - c a t e n i n e x p r e s s i o n w e a k e n s,a n d e x h i b i t a g g r e g a t i o n o f b e t a— c a t e n i n i n t h e n u c l e u s . Co n c l u s i o n:N— C a d h e r i n e x p r e s s i o n w i l l c h a n g e t h e mo ph r o l o g y o f 2 9 3 T c e l l s s i g n i i f c a n t l y,a n d t h e e n d o g e n o u s b e t a— c a t e n i n a n d l— a p h a— c a t e n i n e x p r e s s i o n h a s p o s i t i v e c o r r e l a t e wi t h t h e N- e a d h e i f n e x p r e s s i o n .

[ Ke y wo r d s] 2 9 3 T c e l l s; N e u r a l c a d

h e i f n;R N A i n t e r f e r e n c e;B e t a— c a t e n i n; A l p h a— c a t e n i n

细胞与细胞之间的粘附有众多蛋白参与，如钙黏素 ( C a d h e r i n )、连环素 ( C a t e n i n )和整合素 ( I n t e .

跨膜糖蛋白，在细胞与细胞之间起黏着作用，其胞外区结合有钙离子，故称为钙黏蛋白。神经型钙黏蛋

g r i n )等，钙黏素也称钙黏蛋白 ( C a d h e r i n )是一类 ①本文为 2 0 1 0年国家自然科学基金 ( N o . 3 1 0 0 0 4 7 5 )、 2 0 1 3年河南省教育厅科学技术研究重点项目( N o . 1 3 A 3 2 0 8 6 6)、 2 0 1 1年新乡医 学院重点研究领域招标课题资助项目( N o . Z D 2 0 1 1 - 2 6 )

白( N . C a d h e r i n )是钙黏连蛋白家族中第一个在中枢神经系统中被发现的成员，最先在鸡胚胎神经管中 被发现。它介导细胞间粘附，影响神经细胞的分选、 迁移和定位[ 2]。C a t e n i n控制神经元的分化，在细胞

内B . c a t e n i n与 C a d h e r i n形成复合体，而 o 1 . c a t e n i n 又与 B . c a t e n i n连接，进一步仪一 c a t e n i n与 O t . a c t i n结合，对细胞的形态结构和迁移都具有决定性作用。 但是 .关于 C a d h e r i n和 C a t e n i n的功能研究多讨论自 身的功能。而这种功能是 C a d h e r i n与 C a t e n i n之问形成复合体共同完成还是由某种分子自身发挥功能未

②同时供职于河南省医用组织再生重点实验室，新乡 4 5 3 0 0 3 ③新乡市驼人医疗器械有限公司，新乡4 5 3 4 0 0

④河南省医用组织再生重点实验室，新乡 4 5 3 0 0 3 ⑤通讯作者， E . m a i l: l i n j u n t a n g 2 0 0 2@y a h o o . C O . u k 作者简介：李小英 ( 1 9 7 9年一),女，硕士，讲师，主要从事生化与细胞 生物学方面的研究， E - ma i l: l i x y 1 9 7 9@1 2 6