目的：研究兔骨髓间充质干细胞(BMMSCs)向软骨细胞分化的潜能。方法：将兔髂骨骨髓液进行原代和传代培养,以高糖DMEM无血清特定培养液诱导(含TGF-β2 10ng／ml、地塞米松7mol／L-10mol／L、维生素C50μmol／L),相差显微镜下观察细胞形态变化,免疫组织化学染色检测软骨特异性Ⅱ型胶原表达。结果：BMMSCs诱导后细胞体外扩增能力显著降低,细胞形态由成纤维样细胞梭形向多角形

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现代肿瘤医学

20 0 8年 8月第 1第 8期 6卷

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体外诱导兔骨髓问充质干细胞定向分化为软骨细胞的实验研究 陈任安， 利， 强，淼旺，刘刘郝杜鹃，曹义战，梁英民

I io su yo b ic o do ye i rnit nf m o e ma rw s n h ma e n v r td f a bt h n rc tsdf e t i r b n r t r e ao o o me e c y l m t s c l el s C E e H N R n—a, I iLU Qag H O Mi w n, U Ja, A i z a LA G Yi mi n LU L, I i, A a n o— ag D u n C O Y— h n, I N n g— n T n d s i l, o r l a y Me i l U ies y,Xi n 7 0 3 a g u Hop t a F ut Mi t r d c nv ri h i a t a ' 1 0 8,C ia hn .

【 bt c】 Obet eT xl eted eet t no b ib n ar esnhma s m ci B S s A sat r jc v:oep r h i rnii f abt oem r w m aecy l t el MM C ) i o f ao r o e s( it h n r c tsl k e l i i o no c o d o ye e c i n vt .M e h d:A trp i r u t r n u c h r so MMS s h el e e c l i s r t o s f r e ma y c l ea d s b u u e f u B C,t ec l w r u—

trd i eu—f ec o don u t eme im o tiigT u e nsrm r h n rid ci du c nann GF一1 d xmeh sn,sobcai .T ego t fh e v 3 e a tao e ac ri cd h rw ho e 2, t c h rd B u u e MMS swe eo s re y p a e—mir s o e I C r b ev d b h s c o c p . mmu o itc e c tii g w sa pi d t ee tt ee— n h so h mia san n a p l o d tc h x l e p e so fc l g n t p I r s in o ol e e I.Re l t:T e c i h n e rm p n l

a y sl s h el c a g d fo a s i d e—l e f r b a t p e r n e t oy o a l s i b o lsi a p a a c o a p lg n l k i c

s a e h a a i t f rl ea in Wa o n mak d y mmu o itc e c lsan n fc l g n I w r st e h p .te c p l o oi r t s d w r e l .I b i y p f o n h so h mia t ii g o ol e 1 e e p i v a o i f rte p s g e p cal n te2 a .Co c u i n: e B o h a a e, s il i h 1 t y s e y sd n l so Th MMS sc n df r ni t it h n rc ts—l ec i C a i e e t e n oc o d o y e a i el k s i ir n v to.

【 e od】 n arwm sn hm l t e s D e niin hnrcts K yw rs b em r ee cy a s m ci; i r t t;codoy o o e l f e ao e Mo e On ooy2 0 1 8 1 8 d m c lg 0 8.6( ):2 7—18 29

【摘要】目的： 研究兔骨髓间充质干细胞 ( MM C ) B S s向软骨细胞分化的潜能。方法：将兔髂骨骨髓液进行原 代和传代培养，以高糖 D E M M无血清特定培养液诱导( T F—B O g l地塞米松 7 o L一1 m lL维含 G ln/m、 ml/ 0o、/生素 C5￣ o L, 0 m l )相差显微镜下观察细胞形态变化，/免疫组织化学染色检测软骨特异性 I型胶原表达。结 I果： MMS s导后细胞体外扩增能力显著降低，胞形态由成纤维样细胞梭形向多角形、 B C诱细多边形或类圆形转变，诱导 2天后细胞形态变化最为显著，型胶原免疫组化染色深而均匀。结 1 I I 养的 B MMS s C可定向诱导分化为软骨细胞。

在适当条件下，体外培

【关键词】骨髓间充质干细胞；导；诱软骨细胞

【中图分类号】 7.5 R 33

【文献标识码】 A

【文章编号】62 49一 20 )8 18— 3 17— 92 (08 0— 27 0 1 2方法 .

骨髓间充质干细胞 ( n ar snhm ltm ci. o b em r wmeecy a s es o e l

B S s具有多向分化潜

能， MM C )在合适的环境和诱导因子存在 的条件下，分化为成熟的间质细胞，骨、骨、肪、可如软脂肌

12 1原代培养 .. —

3月龄的新西兰兔，雌雄不限，体重 ( . 20

25 k, . )g骨髓穿刺针接 1 l 0m注射器，注射器内含稀释的肝

肉、神经、肌腱及韧带等组织 j。本实验旨在应用 B MMS s C作为种子细胞体外定向诱导分化为软骨细胞，为进一步研究 B Ss MM C的定向分化提供实验基础。 1材料与方法 1 1主要试剂 .

素钠 30 U约 02 l从髂后上棘穿刺骨髓腔，取骨髓 00、m,抽 液 ( 4 m,慢注入预先加入 4 m e o分离液 (度 3— ) I缓 l rl P c1密

10 3的试管内。将细胞悬液以 20 rm n离心 2 mn吸 .7 ) 00/ i 0 i, 取中间乳白色的单个核细胞层， B P S洗 2次， 1×1 c 以 0/m

的浓度接种于 5 l 0m培养瓶内， 4m G—D M—F2培加 l H ME 1养液(含青霉素钠 IO/m, O U l链霉素 10 g L,入胎牛血 0m/ )加清终浓度为 1%。在 3"饱和湿度、%C孵箱内常规培 0 71 2、 5 O养，2小时后更换培养液， 7全部弃掉未贴壁的细胞，继续培养 且每周换液 2次，天在相差显微镜下观察细胞生长情况。每 1 22传代培养以及流式细胞仪分析 .、细胞生长至 8%融 5

D E培养液、 2N tet it e、ecl细胞分离 M M F一1 ur n M x r Pro i u l液均为 Gbo品；牛血清为杭州四季青生物制品有限公 i产 c胎

司产品；地塞米松、维生素 c、胰酶为 Sg a产品； T F为 i m r G1 h 3 Ppoeh品； o s at—T p I o ae er c产 T M uen i yeI C l n为北京中山生 l g

物技术有限公司产品； D 4 IC购自美国 B i c ne公 C 3 FT D Bo i cs se 司。

合后进行传代培养，传代培养时加入 0 2%胰酶消化， .5相差 显微镜下观察纤维形 M C变圆，入血清终止消化，去消 Ss加倾 2 U7一O—2 O 8 9

收稿日期修回日期

化液，加入培养基，吹打分散细胞，并细胞计数板计数， 5×以 西安 7￣3 1 8

2

o一l o7 O一2 6

作者单位第四军医大学唐都医院，陕西

1 l 0/m密度接种于 5的培养瓶中。取原代培养后第 1 0ml 2天生长良好的细胞 2 5 LL胰酶消化后成细胞悬液，B .m/ P S洗 涤后，入 C 3 FT加 D 4 1C避光反应 3 m n再次洗涤后行流式细 0i

作者简介陈任安 (9 1一)男， 17,陕西韩城人，主治医师，士，硕主

要从事血液病工作，侧重于白血病研究。 【通讯作者】梁英民(9 7一)男， 15,陕西泾阳人，教授，主要从事血 液病的研究，侧重于白血病干细胞的研究。

胞仪分析。 12 3 B . . MMS s向软骨表型的定向诱导分化取第三代 C