胚胎干细胞的分化与定向分化
胚胎干细胞的分化与定向分化
胚胎干细胞建系后人们忙于研究培养条件和寻找维持细胞未分化状态的因子，直到1988年才肯定了LIF能抑制ESCs的分化。因此，ESCs体外分化研究主要是从20世纪90年代起开始。一般采取细胞单层培养或细胞聚集体培养方式进行分化研究。后一种方式ESCs经悬浮培养呈球状，外层被有内胚层样细胞称为拟胚体
(embryoidbodies，EBs)。诱导分化时可加一定的分化诱导剂，常用的是全反式维甲酸(AtRA)。在这类实验中，往往多种类型的分化细胞同时或先后出现，有时有一类细胞可趋于优势，常见的有胚外内胚层细胞、纤维细胞、造血细胞、肌肉细胞和神经细胞等。经过遗传操作的ESCs也可用于体外分化研究，补充这类细胞在体内研究的不足。
(一)神经细胞
维生素A酸(RA)和神经生长因子(NGF)是定向诱导ESCs分化为神经细胞的常用因子。Bain等将ESCs悬浮培养4天后形成EBs，再将EBs在含RA的培养液中进行贴壁培养，可高效和可重复地分化出神经细胞，这些细胞表达神经丝M和微管蛋白，有钠、钾、钙等离子通道的特征。RA经过2～3周诱导，可使培养的ESCs向神经细胞分化，并可形成有典型神经冲动等电生理反应的神经细胞，神经细胞中有神经元特异性细胞骨架、突触囊泡蛋白等特殊蛋白。将神经元特异的SOX2基因转染ESCs，再经RA诱导，可获得高达90%以上表达神经元标志的神经细胞。其机制可能是拮抗分化抑制因子对ESCs
