质粒DNA电泳的三条带
质粒DNA电泳的三条带
质粒 DNA 电泳的三条带 质粒是细胞内的一种环状的小分子 DNA,是进行 DNA 重组的常用载体.作为一个具有 自身复制起点的复制单位独立于细胞的主染色体之外, 质粒 DNA 上携带了部分的基因信息, 经过基因表达后使其宿主细胞表现相应的性状.在 DNA 重组中,质粒或经过改造后的质粒 载体可通过连接外源基因构成重组体. 从宿主细胞中提取质粒 DNA,是 DNA 重组技术中最基础的实验技能.分离质粒 DNA 有三 个步骤: 1,培养细菌使质粒扩增 2,收集和裂解细菌 3,分离和纯化质粒 DNA 碱裂解法是较常用的提取的方法.其优点是得率高,适合于大多数的和菌株,所得产物 经纯化后可满足多数的 DNA 重组操作. 此法采取酸碱度高达 Ph12.6 的碱溶液使 DNA 发生 变性.由于质粒和主染色体的拓扑结构不同,变性时前者虽然两条链分离,但仍然缠绕在一 起不分开;而后者完全变性分,甚至出现断裂.因此,当加入中和液时,溶液 Ph 值恢复较 低的近中性水平,此时, 质粒的两条小分子单链可迅速复性,恢复双链结构,但是主染色 体 DNA 则无法复性.在离心时,大部分主染色体与细胞碎片,杂质等缠绕一起被沉淀,而 可溶性的质粒 DNA 留在上清夜中. 在质粒提取过程中,由于机械力,酸碱度,试剂等的原因,可能使质粒 DNA 链发生断裂. 所以,多数 质粒粗提取物中含有三种构型的质粒: 共价闭合环状 DNA(cccDNA): 质粒的两条链没有断裂;超螺旋 开环 DNA(ocDNA): 质粒的一条链断裂;松弛的环状分子 线形 DNA(lDNA): 质粒的两条链均断裂;线性分子
