可溶性活性磷的测定（钼锑抗法）

一、原理

在酸性介质中，活性磷酸盐与钼酸铵反应生成磷钼黄，用抗坏血酸还原为磷钼蓝后,于882nm波长测定吸光度。此吸光度与活性磷含量成正比。

二、主要仪器与试剂

1、硫酸溶液 CH2SO4=6.0mol/L。在搅拌下将300mL硫酸（ρ=1.84g/mL）

缓缓加到600mL水中。

2、钼酸铵—酒石酸锑钾混合溶液

（1）溶解28g钼酸铵于200mL水中（此溶液变浑浊时，应重配）。

（2）溶解6g酒石酸锑钾于200mL水中，贮于聚乙烯瓶（溶液变浑浊，应重配）。

（3）搅拌下将45mL上述钼酸铵溶液加到200mL 6mol/L硫酸溶液中，加入5mL酒石酸锑钾溶液，混匀，贮于棕色玻璃瓶中（溶液变浑浊时，应重配）。

3、抗坏血酸溶液 溶解20g抗坏血酸于200mL水中，盛于棕色试剂瓶或聚乙烯瓶。在4℃避光保存，可以稳定1个月。

4、磷酸盐标准贮备溶液（0.300mg/L） 称取1.318g磷酸二氢钾溶于10mL硫酸溶液中，全量转入1000mL容量瓶中，加水至标线，混匀，加1mL三氯甲烷。此溶液1.00mL含0.300mg磷。置于阴凉处，可以稳定半年。

5、磷酸盐标准使用溶液（3.00μg/mL） 量取1.00mL磷酸盐标准贮备溶液至100mL容量瓶，加水至标线，混匀，加两滴三氯甲烷。此溶液1.00mL含3.00μg磷。有效期为一周。

6、仪器 分光光度计，2cm或5cm比色皿及一般实验室常备仪器和设备。

三、实验内容和操作步骤

1、绘制标准曲线

（1）量取磷酸盐标准使用溶液0、0.25、0.50、1.00、1.50、2.00mL于25mL具塞闭塞管中，加水至25mL标线，混匀。各浓度依次为0、0.030、0.060、0.120、0.180、0.240mg/L。

（2）各加0.5mL钼—锑混合溶液，0.5mL抗坏血酸溶液混匀。显色5min后，注入2cm或5cm比色皿中，以纯水作参比，于882nm波长处测定其吸光度值Ai。其中浓度为0的比色管中溶液的吸光度为标准空白吸光度Ao。

（3）以吸光度（Ai—Ao）为纵坐标，相应的磷酸盐浓度ρ为横坐标，绘制标准曲线。

2、水样测定 量取25mL经0.45μm微孔滤膜过滤的水样至25mL具塞比色管中，按工作曲线的步骤测定吸光度Aw。同时量取25mL纯水按相同步骤测定分析空白吸光度Ab。

四、结果与计算

用（Aw—Ab）值在标准曲线上查得水样磷酸盐浓度，或用标准曲线线性回归方程计算。