目的 探讨胶质细胞源性神经营养因子(GDNF)在体外能否诱导骨髓基质细胞(BMSCs)向多巴胺(DA)能神经元分化及可能机制。方法无菌条件下,抽取成年SD大鼠胫骨内骨髓组织,分离制备成单细胞悬液进行培养。将增殖传代至第5代的BMSCs随机分为GDNF诱导组和对照组。继续培养7d后,应用BrdU／GFAP、BrdU/NeuN和TH免疫荧光单标和双标技术检测BMSCs增殖和分化情况。结果两组BMSCs继续培

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Ch i n J Cl i n Ne u r o s u r g, S e p 2 0 0 7, Vo l 1 2, N o 9

实验研究 .

胶质细胞源性神经营养因子诱导骨髓基质细胞向多巴胺能神经元分化的观察 束汉生朱成郭之通张弋王淮王昊闰秀琴 【摘要】目的探讨胶质细胞源性神经营养因子( G D N F )在体外能否诱导骨髓基质细胞 ( B M S C s )向多巴胺( D A )能神经元分 化及可能机制。方法无菌条件下，抽取成年 S D大鼠胫骨内骨髓组织，分离制备成单细胞悬液进行培养。将增殖传代至第 5代的 B MS C s随机分为 G D N F诱导组和对照组。继续培养 7 d后，应用 B r d U/ G F A P、 B r d U/ N e u N和 T H免疫荧光单标和双标技术检测

B MS C s增殖和分化情况。结果两组 B MS C s继续培养 7 d后，增殖仍然活跃，有部分细胞向神经元和胶质样细胞分化，呈 B r d u, G F A P、 B r d U/ N e u N和 T H阳性表达，但 G D N F组的增殖力更强，向神经元和 T H神经元分化的数量明显多于对照组 ( P< 0 . 0 5 )。结 论 G D N F能促进 B MS C s的增殖和诱导 B MS C s分化成神经元和胶质样细胞。其中少部分可分化为 T H神经元 (即D A能神经元 )。

【关键词】骨髓基质细胞；胶质细胞源性神经营养因子；细胞培养；分化；神经元；大鼠 【文章编号】1 0 0 9— 1 5 3 X( 2 0 0 7 ) 0 9~ 0 5 4 8— 0 4 【文献标识码】A 【中图分类号】Q 7 8 6; Q 8 1 3 . 5; R 4 5 9 . 9

Ob s e r v a io t n o f Di fe r e n i t a i t o n o f", Bo n e M a r r o w S￣o ma l Ce l l s i n t o Do p a mi n e r g i c Ne ur o n I n d u c e d b y Gl i a- d e r i v e d Ne u r o t r o p h i c Fa c t o r

S HU H a n - s h e n g ,Z h u C h e n g,G u o Z h i - t o n g,e t a 1 . D e p a r t m e n t o fN e u r o s u r g e r y,T h i r d P e o p l e ' s H

o s p i t a l fB o e n g b u a B e n g b u A n h u i 2 3 3 0 0 0, C h i n a

【 A b s t r a c t】 Ob j e c i t v e T o o b s e r v e t o d i f e r e n t i a t i o n o f b o n e m a l 3 ' O w s t r o m a l c e l l s( B MS C s ) d e i r v e d f r o m a d u l t s r a t s i n t o d o p a mi n e r g i c n e u r o n s i n v i t r o i n d u c e d b y g l i a - d e r i v e d n e u r o t r o p h i c f a c t o r ( G D N F ) . Me￣o d s B MS C s w e r e i s o l a t e d f r o m t h e b o n e n a r r o w o f t i b i a c a v i t y o f a d u l t S D r a t s a n d c u l t u r e d . BMS C s u s e d i n t h e s t u d y we r e p a s s a g e 5 c e l l s w h i c h w e r e r a n d o ml y d i v i d e d i n t o GDNF

i n d u c t i o n g r o u p a n d c o n t r o l g r o u p . 1 1 1 e p r o l i f e r a t i o n a n d d i f e r e n t i a t i o n o f B MS Cs w e r e i d e n t i i f e d b y u s i n g i mmn o h i s t o c h e mi c a|a n d i mmu n o l f u o r e s c e n c e t e c h n i q u e s .Re s u l t s BMS C s s h o w e d s i g n i i f c a n t p r o l i f e r a t i o n a n d d i fe r e n t i a t i o n 7 d a y s a f t e r t h e c u l t u r e i n b o t h t h e g r o u p s . A p a r t o f B MS Cs d i f e r e n t i a t e d i n t o t h e n e u mn— l i k e c e i l s w h i c h e x p r e s s e d

B r d u/ Ne u N a n d g l i a— l i k e c e l l s wh i c h e x p r e s s e d

B r d u/ G F A P . A f e w o f t h e B MS C s d i f e r e n t i a t e d i n t o T H - p o s i t i v e n e u r o n s( i . e . d o p a m i n e r g i c n e u r o n s ) . T h e n u m b e m o f B r d u/ N e u N a n d T H— p o s i t i v e c e l s i n G D N F i n d u c t i o n g r o u p w e r e s i g n i i f c a n t l y mo r e t h a n t h o s e i n t h e c o n t r o l g r o u p( P< O . o 5 )。 C o n c l u s i o n s 1 1 1 e B MS C s c a n D r o l i f e r a t e a n d d i f e r e n t i a t e i n t o n e u r o n— l i k e c e l s a n d T H- p o s i t i v e n e u r o n s b y t h e i n d u c t i o n o f GDNF .

【 K e y Wo r d s】B o n e m a r l ' o w s t r o ma l c e l s; G l i a— d e i r v e d n e u mt r o p h i c f a c t o r; C e l l c u l t u r e; N e u r o n a l d i f e r e n t i a t i o n; D o p a m o i n e r g i c h e r o n; Ra t s

骨髓基质细胞 ( b o n e m a￣ o w s t r o ma l c e l l s, B M— S C s )具有跨胚层和多向分化的潜能，属于多能干细

1材料与方法 1 . 1实验材料健康成年 S D大鼠，体重 1 8 0— 2 2 0 g, 雌雄不拘 (东南大学实验动物中心提供 )。 ME M培养

胞。在体外特定培养条件下和适宜的体内微环境影 响下， B MS C s不但可以分化为成骨细胞、软骨细胞、

脂肪细胞和肌母细胞等【 u,而且可以分化为神经元和神经胶质细胞【 2卅。因此， B MS C s有望作为一种新的 种子细胞替代治疗颅脑损伤

和中枢神经退行性疾

基、胎牛血清购于杭州四季青公司； 5一溴一 2脱氧尿 苷( 5’ b r 0 mo d e o x y u r i d i n e, B r d U)和小鼠抗大鼠 B r d U 单克隆抗体、小鼠抗大鼠神经元特异性核蛋白( N e一

病。本文就 B MS C s在胶质细胞源性神经营养因子 ( i a— d e r i v e d n e u r o t r o p h i c f a c t o r, G D N F )诱导下是否能向多巴胺 ( d o p a m i n e, D A)能神经元分化进行了进 一

基金项目：蚌埠市科技局资助项目(编号：蚌科[ 2 0 0 3】 1 4号 ) 作者单位：蚌埠市第三人民医院神经外科 (安徽蚌埠， 2 3 3 0 0 0 ) ★ 厦门市第三医院神经外科 (福建厦门， 3 6 1 1 o o )

步观察。