目的研究体外三维培养条件下,成人骨髓间充质干细胞(BMSCs)定向分化软骨细胞可行性。方法用密度梯度离心法分离纯化BMSCs,并传代扩增后,用离心三维培养法在软骨诱导剂下进行诱导培养,以常规培养液培养的BMSCs作为阴性对照,于诱导培养第21天取出标本行苏木精-伊红染色、甲苯胺蓝染色、s-100蛋白免疫组织化学检测。结果BMSCs经21d的离心三维诱导培养后,培养管出现软骨外观组

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实验研究

成人骨髓间充质干细胞体外诱导分化为软骨细胞的 实验研究△ 韩建伟杨彤涛孙宏慧高杰刘国柱裘秀春范清宇马保安’

摘要目的研究体外三维培养条件下，成人骨髓问充质干细胞 ( MS s B C )定向分化软骨细胞可行性。方法用密度梯度离心法分离纯化 B C,并传代扩增后，用离心三维培养法在软骨诱导剂下进行诱导培养，以常规培养液培养的 B C作为阴性 MS s MS s 对照，于诱导培养第 2天取出标本行苏木精一伊红染色、甲苯胺蓝染色、S 0 1一10蛋白免疫组织化学检测。结果性。对照组阴性。结论 关键词

B C经 2 MS s l

d的离，维诱导培养后，培养管出现软骨外观组织块，组织切片甲苯胺蓝染色呈明显异染，s 0 6-一10蛋白免疫细胞化学检测阳成人 B C在三维培养条件下可成功诱导分化为软骨细胞。 MS s 骨髓间充质干细胞；分化；软骨细胞

Ex r e a t dy o fe e i to o pe m nt lS u n Dif r nta in fHum a n a r w— de ie ee c m a t m l nt n Bo e M r o rv d M s n hy lS e Cel i o Cho dr c tsi to s n o y e n Vir

Ha in i Y n T n to, S i n h i e 1 Orh p e i nJa we, a g o g a u Ho g u, t . a to a dc sOnooyI si t, T n d clg nt u e t a g uHop tl h o rhM i tr si,teF u t a l ayMe i i d— c lU n v r iy, Xi’ n, 71 38 a i e st a 00

Ab ta t Obet e Tosu y tefaiit fid cn d l b n ro mee c y l tm el it h n rc t h e src jci v td h esblyo uiga ut o emar w s n h ma e c l oe o do ye i t re—dme— i n s sn sn i n s n l o dt n i a c n i o .M eh d C l b

an d i o e ma r w s i ts b e st r d e tc n r u a in we e c lu e n ly r f m o i tos e l o t i e n b n ro a pr e y d n i g a in e ti g to r u t r d i mo oa e r s a y f n o a uta d t e a s e rd i t u e n l we of r t r e— i n in l g r g t h mial e i e d u i cu i gTGF— d l n h nt n fr e ot b sa d al d t o m h e— dme so a g e a e i a c e c l d f d me im l dn r n o a sn y n n—

口 i u n dx m t a n t .B C r dtea ge ae i t ecn e t n l u u em du a eaie o t 1 hs w g r. Ln l e a eh s e c MS s ome h g rg t o vn i a c l r e im s g t nr .T e t oa ge si o e f sn h o t n v c o e g tswe e h r e t d a tr 2 a e r a v se f 1一 d y’ h n r g nc i d ci n F rh soo ia v l ain, s c in r t i e t a mao yi e a S c o d o e i n u t . o itlg c le a u t o o e t s we e san d wi h e tx l o h n— e i n oud n le F ri s o n a d tl ii e bu . o mmu o it c ens r v l ain, sc in r c b t d wi h n co a a t o y s e i ct一1 0 n h so h r ity e au t o e t sweei u a e t t e mo o l n J n i d p cf s 0 o n h b i o po e r ti n.Re u t BM S s we e c l r d i h e— dme so a o d t n fr2 a s wi e i e d u a d wee mea h o sa b sl s C r u t e t r e u n i n in l n ii o 1 d y t d f d me im n r t c r ma i y c o h n t l ii eb u n o l ei e t id b o i v ti i g frS 1 0 p o en.Th o t

l r u sn t ou dn l ea d c u d b d n i e y p st e sann 一 0 r t i f i o e c n r o p wa o .Co c u in Ad l B S sc n og n lso ut M C a b d c d it h n r c ts i h e— dme s n l o dt n b h h mi l ei e d u . ei u e n o c o d o y e n t r e n i n i a c n i o y t ec e c l d fn d me im o i ay Ke r s Me e e y l tm el Di e e tain; C o d o y e y wo d s n h ma e c l; f r n it s f o h n rc t

软骨缺损的修复一直是骨科治疗的难题，近年 来软骨组织工程技术的发展使得软骨损伤的治疗取得一定的进步，然而缺乏理想的种子细胞一直是限 制软骨组织工程发展和应用的主要瓶颈。骨髓间充

愿者 (血液系统疾病)无，术中用含有 I肝素 (0/ ) ml 10U m1 的 1注射器从志愿患者髂骨中吸取或多点抽取骨髓 5 Oml~

1。用等体积的无血清低糖 D M ( i o 0ml ME Gb )培养液稀释， c 将稀释液加至密度为 10 3g ml P ro分离液 ( B公 .7/的 e l c1 TD 司 )液面上，2 0/ n离心 2 n 0 0 rmi 0mi,吸取单个核细胞层， P S液洗涤 2,弃掉 P S液。用含 1%胎牛血清 ( B次 B 5杭州四

质干细胞 ( MS s B C )是骨髓来源的具有多向分化潜

能的干细胞，在特定条件下可分化为成骨细胞、软骨细胞、脂肪细胞等多种细胞…,为组织工程种子 细胞的来源开辟了新的途径。本实验以成人 B C MS s

季青 )的低糖型 D M完全培养液重悬细胞，计数。以每 ME瓶 5 0个细胞的密度接种于 2 m2塑料培养瓶 ( a o X1 5c Fln c 公司 )内，置于 3 7℃,5 C 2% 0、饱和湿度孵箱内培养。5d

为研究对象，应用三维培养法诱导其向软骨细胞分 化，以探讨其向软骨方向分化的可行性，为组织工程化软骨发展提供一定理论基础。 1材料与方法

首次换液，每 3 ~4d换液一次。当细胞达 8%融合单

层后 0 用 0 2%胰酶 ( rmea公司 )和 0 0% E T ( i .5 po g .2 D A S ma公 g

司 )消化细胞 (7℃ 2 i) 0 0rmi心 5mi,然 3~3r n,10/ n离 a n

后按 1: 3的比例进行传代接种培养，并记为 P,培养基改 1 用含 1%胎牛血清的低糖型 DME 0 M完全培养液。代培养传

1 1 B C的分离和培养骨髓来源为行髂骨取骨术的志 . MS s △基金项目：国家自然科学基金资助项目 (0 7 13 3 62 4 )第四军医大学唐都医院骨肿瘤研究所陕西省西安市 7 0 3 1 08

通信作者