套式PCR

江苏农业学报(JiangsuJ.ofAgr.Sci.),2010,26(1):91～9591

逯晓敏,冯志新,刘茂军,等.猪肺炎支原体套式PCR检测方法的建立及应用[J].江苏农业学报,2010,26(1):91295.

猪肺炎支原体套式PCR检测方法的建立及应用

逯晓敏

1,2

,　冯志新,　刘茂军,　吴叙苏,　甘　源,　张　映,　邵国青

111121

(1.江苏省农业科学院兽医研究所,农业部动物疫病诊断与免疫重点开放实验室,,江苏

南京210014;2.山西农业大学动物科技学院,山西太谷030801)

　　摘要:　根据GenBank中登录的猪肺炎支原体P36()2对引物,建立套式PCR方法。,气管肺泡灌洗液进行了检测。bp的目的条带,而其他病原菌未出现特异性扩增条带。建立的套式10个CCU(颜色变化单位)。支气管肺泡灌,。

;P36;套式PCR

中图分类号:　S858.282.62　　　文献标识码:　A　　　文章编号:　100024440(2010)0120091205

EstablishmentofANestedPCRAssayforDetectionofMycoplasmahyo2

pneumoniae

LUXiao2min,　FENGZhi2xin,　LIUMao2jun,　WUXu2su,　GANYuan,　ZHANGYing,　SHAOGuo2qing

1,2

1

1

1

1

2

1

(1.InstituteofVeterinaryMedicine,JiangsuAcademyofAgriculturalSciences,KeyLaboratoryofAnimalDiseasesDiagnosticandImmunology,MinistryofAgriculture,NationalCenterforEngineeringResearchofVeterinaryBio2products,Nanjing210014,China;2.CollegeofAnimalScienceandTechnology,ShanxiAgriculturalUniversity,Taigu030801,China)

　　Abstract:　TwopairsofprimersweredesignedaccordingtothesequenceofP36(L2lactatedehydrogenase)geneof

MycoplasmahyopneumoniaepublishedinGenBank,andanestedPCRassaywasestablishedforthedetectionofM.hyopneu2moniae.DifferentM.hyopneumoniaestrainsandthebronchoalveolarlavagefluidofintrapulmonicimmunizationwithattenua2

tedM.hyopneumoniaevaccineweredetectedwithnestedPCR.Aspecific427bpfragmentwasamplifiedfromdifferentM.hyopneumoniaestrainsbythedevelopednestedPCR.Non2M.hyopneumoniaedidnotshowspecificamplifiedfragment.The

nestedPCRhadhighsensitivitytofordetectionof10CCUM.hyopneumoniae.TheresultsofthebronchoalveolarlavagefluiddetectedbynestedPCRshowedthattheamplifiedresultswaspositivebyintrapulmonicimmunization.

Keywords:　Mycoplasmahyopneumoniae;P36;nestedPCR

　　猪支原体肺炎(Mycoplasmapneumoniaeofswine,MPS)又称猪气喘病、地方流行性肺炎,是由猪肺炎支原体(Mycoplasmahyopneumoniae)引起的

收稿日期:2009209218

基金项目:公益性行业(农业)科研专项(200803020);中国博士后基

金项目(20070421022);江苏省农业科技自主创新基金项目[CX(08)608]

作者简介:逯晓敏(19822),女,山西大同人,硕士研究生,研究方向为病

原微生物分子生物学。(E2mail)luxiaomin405@126.com

通讯作者:邵国青,(Tel)025284391973;(E2mail)84391973@163.com

一种以慢性的接触性传染病

[1]

。MPS在世界各地

广泛分布,发病率高,主要引起猪的生长受阻和饲料转换率的大幅下降,是造成养猪业经济损失的最重要疾病之一

[2]

。M.hyopneumoniae感染的病猪易遭

[3]

受其他病原体的侵袭,常因坏死性、化脓性细菌的继发感染而死亡

。因此,对猪支原体肺炎正确诊

断、检测和及早防治非常重要。

　　目前M.hyopneumoniae的诊断主要方法有分离培养法、免疫荧光法、核酸探针法以及聚合酶链式反

[4]

应(PCR)等。这些方法虽然可以对病原做出诊