目的探讨Ⅲ类组蛋白去乙酰化酶SIRT1对二甲亚砜(DMSO)诱导的P19CL6细胞向心肌细胞分化的作用。方法以稳定表达SIRT1及负显性突变体SIRT1H363Y的P19CL6细胞为实验组,稳定表达pcDNA3.1载体及空白P19CL6细胞为对照组。1%DMSO诱导细胞分化,在诱导后0、4、8、12d,分别收取细胞,以RealtimePCR检测心脏特异性转录因子NKX2.5、GATA4和心脏功能蛋白a-MHC、ANP的表达。结果 SIRT1过表达使P

安微医科大学学报

At nvrtt dc aiA h i 2 1 c;5 5 c U i saiMein l n u 0 00 t ( ) a ei s i s 4

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组蛋白去乙酰化酶 SR 1促进 P 9 L IT 1 C 6细胞向心肌细胞分化 郑 摘要目的

伟，梁姝颈，陈厚早，云彪，德培鲁刘 程。P 9 L 1 C 6细胞是小鼠畸胎瘤细胞 P 9衍生的 1细胞系，也是研究心肌细胞分化的一种经典模型。 当用含 1 D O的培养基诱导时，细胞能高效% MS该的分化成搏动的心肌细胞。本研究采用 R at e elm i P R等技术， C以稳定表达空载体、生型 SR 1和野 IT

探讨Ⅲ类组蛋白去乙酰化酶 SR 1对二甲亚 IT

砜 ( MS诱导的 P 9 L D O) 1 C 6细胞向心肌细胞分化的作用。方法以稳定表达 SR 1及负显性突变体 SR 1 H 6 Y的 IT I T 33 P9 L胞为实验组，定表达 pD A . 1C 6细稳 c N 3 1载体及空白

P9 L 1C 6细胞为对照组。1 D O诱导细胞分化，% MS在诱导后 0 4 8 1,、、、2d分别收取细胞， R at eP R检测心脏特异以 elm C i性转录因子 N X .、 A A K 2 5 G T 4和心脏功能蛋白 aMH A P— C、 N 的表达。结果 SR 1过表达使 P 9 L IT 1C 6细胞在分化过程中 心脏特异性转录因子及功能蛋白的表达与对照相比均提前

负显性突变体 SR 1H 6 Y的 P9 L胞为研究 IT 33 1C 6细 对象，观察 SR 1对 D O诱导的 P 9 L IT MS 1 C 6向心肌细胞分化影响，步探讨 SR 1对心肌分化影响。初 IT 1材料与方法

及升高，而负显性突变体 SR 1H 6 Y过表达使 P 9 L IT 3 3 IC 6细 胞在分化过程中标志蛋白的表达与对照相比出现明显滞后

和降低。结论 肌细胞分化。 主题词自由词

SR 1进 D O诱导的 P9 L IT促 MS 1C 6细胞向心

1 1材料 .

小鼠畸胎瘤细胞 ( 1 C 6为日本东京 P9 L )

大学 Moe zn教授馈赠，养基 (ME为 Ivt gn培 M— nioe r公司 Gbo产品，牛血清为中国医学科学院血液 ic胎 研究所产品，酶及双抗为 A E C胰 MR S

O公司产品，二 甲亚砜 ( MS ) G 1 D O和 4 8为 Sg a公司产品。SR 1 im I T

Sr i 1心肌细胞；胞分化 iu ; tn细 P9 L IC 6细胞 Q7 1

中图分类号

文献标识码 A文章编号 10 00—19 (0 0 0 4 2 2 1 )5—09 0 5 7— 4

抗体为 SnaCu公司产品。转染试剂 Vgfe为 at rz io t e威格拉斯生物技术公司产品。R A提取试剂 T— N R I l Ivt gn公司产品。R a i C试剂为 z为 n ioe o r ehmeP R TAKARA S YBR Gr e r a me e n e hi PCR k t i,Re hi a me

SR 1 Sf i )存在于哺乳动物的酵母染 IT ( iun1是 l色质沉默子 SR I2的同源体，一种 N D是 A依赖的Ⅲ 类组蛋白去乙酰化酶¨。SR 1与调节了体内基』 IT参 因转录、量代谢以及细胞衰老等过程，其在糖代能尤谢、代谢、节胰岛素分泌中发挥着重要的作脂调 用 J。研究表明 SR 1从小鼠心脏发育开始， IT直

P R仪为 Bo a 5 C i dI。 R Q

12细胞培养 .

P9 L 1 C 6细胞用含 1%胎牛血清 0

和双抗 (霉素、霉素 10/ 1青链 0 U m )的培养基在

至出生后 2 7个月一直持续较高表达水平，而

3℃、% C, 7 5 O的孵箱中培养。诱导时，细胞密度为每培养瓶 (7 m ) . 15e 3 7×1个细胞，用含 1 0、使% D O培养基培养，入 D O时记为 0d诱导天 MS加 MS,数从此计算。 1 3建立真核表达细胞系人 p D A SR 1和 . c N—IT p D A—I T 3 3 c N SR 1H 6 Y质粒由 T koIs tt o eh o y ntue f c— i T n l y的 I ia a教授惠赠。按照威格拉斯生物技 oo g s kw h

SR 1敲除小鼠心脏出现明显发育缺陷，示 IT显 SR 1于心脏发育发挥重要作用，有关 SR 1 IT对但 IT对心脏发育过程的影响并不清楚。 在胚胎发生过程中，等脊椎动物的心脏是由高

胚胎干细胞较早分化形成的一个器官，脏的发育心 是一个极其复杂的过程，涉及若干个

基因在不同它时间、同空间的表达及心肌细胞的分化形成过不 21 0 00— 5—1 0接收

术公司转染说明书将 pD A .、c N—IT e N 3 1 pD ASR 1和 p D A SR 1H 6 Y转入 P 9 L c N .I T 3 3 1 C 6细胞，后利用然

基金项目：家重点基础研究发展汁划项目 ( 7国 9 3)(号：编 2 0 C 53 0 );家高技术研究发展计划项 ( 6 06 B0 81国 8 3) 2 0 A 0 A 0;家重点实验室专项经费 ( 0 00 0 6 A 2 4 6)国 2 6 24)

筛选标记 G 1 (0 m ) 48 6 0 1筛选，连续培养 1, 0d取存活细胞。进行 Wet nbo检测建系是否成功。 s r lt e 1 4 R A样品的准备和 RelmeP R检测 . N at C i取

作者单位：中国医学科学院北京协和医学院，基础医学研究所，医学 分子生物学国家重点实验室，京北作者简介：郑伟，,士研究生；男博 1 00 005

诱导后 4 8 1、、2d的细胞， R zl步法提取细胞总 Tl一 o

R A,量后反转录备用。P R每个样品每对引物 N定 C 均设 3个复孑。SR 1引物： C T A G C A G L IT 5 TC G TA G— GATGGTAT一 .一 3 5 GCGTGTCTATGTTCTGGCTAT一： 3

刘德培，,男博士，教授，士生导师，博责任作者，— all E m i:— i u p p mc e u. n d@ u .d c

N X. K 2 5引物：, A A AG C A A G A G一， 5_ C A C G G C G T G3 G