目的建立相思子毒素双抗夹心ELISA检测方法并进行方法学评价。方法优化最佳相思子毒素多抗包被浓度后建立了相思子毒素双抗夹心ELISA检测方法,鉴定其检测灵敏度、线性范围、特异性、重复性、回收率等。结果双抗夹心ELISA方法检测相思子毒素的最小检出限为1ng/mL,标准曲线在10～100ng/mL范围内线性良好。血清中加入已知量的标准毒素蛋白,测得平均回收率为89%。结论本方法检测相思子

Me Se 2 0. 1 1 No. d. n. 01 Vo . 9. 9

存在，且糖尿病的病情与自身抗体异常程度一致；而这自身抗体的意义不仪是区分糖尿病的类，也反映 r病人免疫功能的异常及机体对胰岛素的不敏感和/效力或 减低。

[ 2】王话兰 .子医学}临床诊断及研究中的进展【 1中量 J斟医师杂志， 0 4, (: 8— 9 2 0 6 3) 2 9 2 1 f张海涛量子医学与健康革命 .岛全圜量子医学筹 1 3青 备研讨会文献汇编『 .0 6: 6 1 . G]2 0 1— 7 I刘幼硕 .年人糖尿病的诊断及治疗要点 f]中华老 41老 . J年医学杂志， 0 5, 4 1 ) 76 80. 20 2 (0:9— 0 f】夏燕萍，茂华，刚， .年精尿病患者胰岛细胞 5俞陈等老自身免疫分析 l中华老年医学杂志， 0 8, 7( ) J】 20 2 I: 2—2 . 7 8

由于该阶段的异常指标可受多种因素的影响，其发展趋势会有所不同。般可演变为：一是不良刺激反复作一 用，病从无症状到有症状，临 J阶段或慢性病阶段；疾至术 二是通过调理或相应的干预措施，转为正常；足停留可

在某阶段呈蛰伏状。因此对异常指标患者做针对性的预防措施，到疾病的早发现、治疗、预防，减少疾病做早 对 及慢性并发症的进一步发生发展有重要意义。

【杨琳，智广，}等 .种映岛自身抗体诊断成人 6】周黄，四

隐匿性自身免疫性搪尿病的临床意义[]中华内分泌 J 代谢杂志， 0 5, 1 4) 3 7 3 0. 20 2 (: 2— 3 【]萧建中，兆军，金，等“ 7畅王 2型糖尿病”患者胰岛

参考文献： I]张旭良，健 .子医学与量子振仪 QR J .学设】骆量 A[]医

细胞抗体榆测的意义[]华内分泌代谢杂志， 0 5, J中 20 21f 5): 3— 4 4 8 4 0.

备信息， 9 9, 5 19 1: 4.

f稿日期： 09 1 - 51收 20—22

文章编号： 0 5 6 9 2 1 0— 8 0 0 10— 1X(0 0)9 04— 3

相思子毒素双抗夹 IA D LS检测方法的建立与评价 E 2

67济南军区青岛第二疗养院 60 1张立营孙英姿 赵怀龙傅兴伦 20 1济南军区联勤部疾病预防控制巾心 504 【要】目的建立相思子毒素双抗夹心 E I 测方法并进行方法学评价：方法优化最佳相思子毒素多抗包被浓度后摘 LS A 建立了相思子毒素双抗夹心E IA测方法， LS捡鉴定其检测灵敏度、性范围、异性、线特重复性、回收率等结果双抗夹心 E IA方法检测相思子毒素的最小栓出限为 1n/ LS gmL,准曲线在 1标 0~10 / O mL范围内线性良好血清中加入已知量的标 g

准毒素蛋白，得平均回收率为8%。结论本方法检测相思子毒素的可测范围广、异性强、测 9特灵敏度高、变异系数较小，表 明其灵敏、异、靠：特可

【键词】相思子毒素；关双抗体夹心E A;法学评价 1S方 I【 src】 Obe t e o etbi o beat o ysn wi LS to o eet n o bi n nlz h to oo y Abt t a jci T s lh ad u l ni d ad c E IA meh dfrd t i fa r ad aa eteme d lg . v a s b h co n y h Me h s At r t e o t l c a i g c nc n r to f p l c o a n i d f a r s o tmi e a d u l n i o y s n wih EL S l od i h p i o tn o e ta i n o o y l n l a t e ma bo y o b i wa p i z d: o b e a t d a d c l A n b meho s e t b ih d. t c i n s n i v t l e r r n e, pe i c t r pe t b lt a d r c v r ae we e a s y d Re ut Th i i t d wa sa ls e De e t e st i o i y。 i a a g s c f i n i y, e a a ii y n e o e y r t r s a e s l s em n— e ld t c i i f a rn wa J g mL a d t e ln a i o tn a d c r wa n n h a g f 1 o 0 g mL. e a e a e r a e e t n l t o b i s n/ n h i e rt f

sa d r u ve o mi y s f e i t e r n e o 0 t 1 0 n/ i Th v r g

r c v r s 9 wh n t e n e o e y wa 8% e h k own a o n s o t n a d t x n p o en wa d e i t b o d a l s Con l son Th s m eh d f r m u t f sa d r o i r t i s a d d n o l o s mp e . cu i i to o

d tcin o bi s snst e, p cfc a d rl bl e a s fiswie me sr a g hg e st i g d s e i ct s l c e f eeto fa rn i e iv s e i n ei e b c u e o t d au e rn e, ih s n ivt i i a i y, oo p cf i i y, mal o f - i ce to a i b l y. i n f v ra i t i

【 e od】 A r; o be n b d a d i LS Me o o g a e a a o K yw r s bi D u l a t o ysnw c E I n i h A; t d l i l vl t n h o c u i

相思子毒素fbi)是存在于豆科植物相思子 ( bu ar n A rs pea r s种子中的一种毒蛋白，蓖麻毒素 (c ) rct i ) ou与 r i同为Ⅱ in 型核糖体失活蛋白( I) R P家族成员，迄今为止所发现的毒是性最强的植物毒素之一，毒性是普通化学武器的几百倍。 相思子毒素已经成为一个成功的天然毒素战剂 1: 由于相思子毒素天然资源比较丰富，制备比较容易， 并且相思子毒素中毒后无特异症状，f症状时已经造¨现成机体严重的器质损害，备生物毒素武器典特征，具 此历来为外军所高度重视 l。 20年世界生物及毒素武 1在 01 1器大会 (T ),思子毒素再次被列入重点核查清单。 B WC￣相 因此，论是从核查、用治疗，是从防护日的，展对无应还开相思子毒素的研究具有十分重要的意义 1。 本研究利用相思子毒素的多抗和单抗建立相思子毒

11材料 .

相思子毒素、思子毒素单抗和多抗南本实相

验室保存， R标记的羊抗鼠抗体购自北京华美公司。 H P 12检测过程①样

品稀释：相思子毒素进行如下稀 . 将 释， 1 g n 1 0 gmL、0 gml、 n/ 1 0 gmL、 h L、 0 n/ 1 n/ 1 gmI、 0 p/

1 gn 0g。包被：入包被液稀释的相思子毒素 0Dh L、/ mL②加多抗 f:10 0释 ) 10 L孑 4℃过夜。甩干包被 1 0稀，O / L,液， B T冲液洗涤液洗涤 3, i/。③封闭：入 P S缓次 3r n次 a加 1 S%B A封闭液，】 L孔， 7℃ 6 i l( 0/ 3 0 mn,甩干； B T P S洗涤液洗涤3 . n次④加样：入相思子毒素蛋白，次 3mi/加 1 0 L孔，个样品苇复 3孔，时设阳性对照、性 0/每个同阴样品和空白对照，7 q 0 mn干液体， 3 c 6 i甩洗涤液洗涤 3,次 3mn次。加相思子毒素单抗 ( 40 0释 )10 L孔。 i/⑤ 1: 0稀：0/ 3 7℃ 6 n 0mi甩干液体，洗涤液洗涤3, n次。⑥每孔加次 3mi/

素的双抗夹心E IA检测方法，对检测方法进行了方法 LS并学评价。本方法对建立相思子毒素检测试剂盒具有重要的现实意义与应用价值。 1材料与方法

入 10 L根过氧化物酶标记羊抗兔IG 0辣 g抗体 ( 50 0, 1: 0 ) 3 7℃恒温 05h洗板 3同前 )每孔加入 10 L物溶 ., 次(, 0底 液显色 1 i加入 20m l S 10 L终止反应， 5mn, . o LH2/ O 0于酶标仪上读取 4 0n 5 m吸收波长处的 O值。⑦结果判断： D

基金项目：岛市公共领域科技支撑计划项目 (9 1 12一 s 青 0——— 8 nh)