基因枪轰击中几个重要参数对小麦基因转化的影响

第38卷　第2期

2004年　　6月河南农业大学学报JournalofHenanAgriculturalUniversityVol.38　No.2Jun.　　2004文章编号:1000-2340(2004)02-0123-04

基因枪轰击中几个重要参数对小麦基因转化的影响

孙红正,陈新建,吕德彬,陈军营,尹海燕

(河南农业大学农学院,河南郑州450002)

摘要:对基因枪轰击小麦幼胚愈伤组织过程中几个重要参数的研究结果表明-1500μg 枪-1,颗粒直径110μm的金粉转化效果好于直径116μm,81966MPa时,轰击后愈伤组织的再生绿点率明显高于可裂膜片为71586MPa,9cm.

关键词:小麦;基因转化;轰击参数

中图分类号:S51211　　　　parametersongenetransformation

ofwheatbyparticlebombardment

SUNHong2zheng,CHENXin2jian,LΒDe2bin,CHENJun2ying,YINHai2yan

(AgronomyCollegeofHenanAgriculturalUniversity,Zhengzhou450002,China)

Abstract:Theinfluenceofseveralimportanttechnicalparametersinmicroprojectilebombardmentwasstudied.Andtheresultsshowedthatunderidenticalconditions,transformationratioofAudosageof250μgpershotwashigherthanthatof500μgpershotandAuparticleof1.0μmindiameterwasbetterthanthatof1.6μm.Andtherewasnosig2nificantdifferencebetweensingleshotanddoubleshots1Whentherupturepressurewas81966MPa,percentageofre2generatedgreenspotsafterbombardmentwasmuchhigherthanthatof71586MPa1Intargetdistanceexperiment,ef2fectof9cmwasthebest1

Keywords:wheat;genetransformation;bombardmentparameters

　　1987年美国Cornell大学STANFORD等首创基因枪法以来,已在农业生物技术领域得到广泛应用

,成为一种将外源基因导入植物体内的重要方法.小麦的转基因技术首次是由VASIL等[1]用基因枪法实现的.尽管随后又出现了农杆菌转染法、PEG法、脂质介导法、花粉管通道法以及电脉冲法等转基因技术,但由于小麦遗传背景极为复杂,使这些转基因技术难以在小麦转基因技术得到有效的应用.因此,目前小麦的基因转化仍以基因枪法为主,基因枪法转化小麦的转化率在011%～517%之间[2],但由于转化技术及所用受体材料的影响,通常转化效率低于1%,因此基因转化技术已经成为小麦遗传转化研究的问题之一,严重地制约了生物技术在小麦新品种培育中的应用.鉴于此,优化轰击参数,提高小麦基因转化的效率是非常必要的.作者以小麦幼胚愈伤组织为受体,以小麦高分子量麦谷蛋白5亚基和10亚基为目标基因,在轰击受体时对单双枪、靶距、可裂膜片压力、金粉用量、金粉直径5个参数对轰击效果的影响进行了研究,以期优化基因枪法转化小麦的技术参数,提高转化效率.

1　材料与方法

111　轰击材料的准备及处理

受体小麦品种为豫麦18号、豫麦21号、豫麦49号、豫农9901.小麦开花后10～12d剥取幼胚,置于收稿日期:2003-12-04

基金项目:河南省杰出人才创新基金项目(0221000900);国家转基因植物研究与产业化开发专项(JY03-B-20-02)

作者简介:孙红正(1979-),男,河南平顶山人,河南农业大学在读硕士研究生1