第二军医大学学报

AcadJSecMilMedUniv

　2003Mar;24(3)

333

研究快报

AnnexinB1:一种新的细胞凋亡检测用蛋白

张　毅,郭瀛军,王　芳,高远舰,颜宏利,孙树汉3

(第二军医大学基础医学部医学遗传学教研室,上海200433)

[摘要]　目的:为细胞凋亡研究提供一种新的检测用蛋白。方法:在大肠杆菌中表达,经离子交换层析后

得纯品,异硫氰酸荧光黄(fluoresceinisothiocyanate,FITC)标记AnnexinB1;Jarkat;以

FITC标记的AnnexinB1检测凋亡细胞。结果:FITC标记B1与亡胞表面磷脂酰丝氨酸(phosphatidylserine,PS)结合,使凋亡细胞呈阳性着色,:白AnnexinB1,[关键词]　AnnexinB1;细胞凋亡

[中图分类号]　R329.25[[文章编号]　02582879X(2003)0320333202

AnnexinB1asafordetectingapoptosis

ZHANGYi,GUOYing2Jun,WANGFang,GAOYuan2Jian,YANHong2Li,SUNShu2Han3(DepartmentofMedicalGenetics,CollegeofBasicMedicalSciences,SecondMilitaryMedicalUniversity,Shanghai200433,China)

[ABSTRACT]　Objective:Toprovideanovelproteinfordetectingapoptosis.Methods:AnnexinB1wasexpressedinE.coliandpurifiedwithionexchangechromatography.ThenAnnexinB1labelledwithFITCwasusedtodetecttheapoptosisofJurkatcells,whichwasinducedbycamptothecin.Results:TheFITClabelledAnnexinB1efficientlydetectedapoptosiswithpositivefluorescentsignalwhenitboundtophosphatidylserineonapoptoticcellmembrane.Conclusion:AnnexinB1maybeanovelproteinwhichcanbeutilizedindetectingapoptosis.

[KEYWORDS]　AnnexinB1;apoptosis

[AcadJSecMilMedUniv,2003,24(3):3332334]

　细胞凋亡是细胞生命周期中的重要组成部分,其

主要特征为细胞萎缩、胞膜结构的改变、核染色质致密、内源性核酸酶性DNA降解等。与之相对应的检测方法包括形态学方法,如电镜观察凋亡细胞;反映凋亡细胞膜改变的方法,如AnnexinⅤ检测法[1];反映DNA有规律断裂的方法,如DNA末端标记法等。其中AnnexinⅤ检测法是针对细胞凋亡最早期特征而设计的。在凋亡早期,细胞已丧失了膜磷脂化合物的对称性,磷脂酰丝氨酸(phosphatidylserine,PS)从细胞膜内转移到细胞膜表面[2]。AnnexinⅤ是一种钙依赖性磷脂结合蛋白,可在钙离子存在情况下与PS结合,从而在细胞凋亡早期尚未出现DNA链断裂情况下对其进行检测,具有敏感快捷等优点。但目前市售的AnnexinⅤ检测试剂盒均为进口产品,价格普遍昂贵。

AnnexinB1(曾命名Annexin32)是孙树汉等[3,4]首次克隆的一个新的膜联蛋白家族成员,与AnnexinⅤ同属一个蛋白家族。研究表明AnnexinB1具有较强的钙依赖性磷脂结合活性,对凋亡细胞表面的PS有高亲和力,故可用于凋亡细胞的检测。本研究制备重组AnnexinB1蛋白,以异硫氰酸荧光

①

黄(Fluresceinisothiocyanate,FITC)标记,然后检测凋亡细胞,同时联合应用DNA染料碘化丙啶(PI)区分死亡细胞,为国产新型细胞凋亡检测试剂盒的研究奠定了基础。1　材料和方法

1.1　材料　质粒pJLA2AnnexinB1及含重组表达

质粒pJLA2AnnexinB1的菌种由本室保存。Jurkat(T淋巴细胞白血病细胞株)购自中科院细胞库;DEAESepharoseFastFlow、Source15Q及SepharoseG25层析介质购自Pharmacia公司;FITC和PI为Sigma公司产品;羟基喜树碱由黄石飞云制药有限公司生产;ApoAlertAnnexinⅤ2FITCapoptosiskit为Clontech公司产品;其他试剂为分析纯,购自上海生化试剂公司。

1.2　AnnexinB1蛋白的表达与纯化　参照文献[3,4]制备高纯度、高活性的AmmexinB1。

①

[基金项目]　国家“863”计划项目(2001AA213111).

[作者简介]　张　毅(19742),女(汉族),博士生.

3

Correspondingauthor.E2mail:shsun@smmu.edu.cn